维生素的测定解读.ppt

（6）比色测定　　用1cm比色杯，以石油醚调节零点，于450nm波长下，测吸光度，以其值从标准曲线上查出β－胡萝卜素的含量，供计算时使用。标准曲线绘制（7）标准曲线制备　　 取β－胡萝卜素标准使用液(浓度为50μg/mL)1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00mL，分别置于100mL具塞锥形瓶中，按样品测定步骤进行操作，点样体积为0.100mL，标准曲线各点胡萝卜素含量依次为2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、20.00μg。以胡萝卜素含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 （8）结果计算 三、维生素E的测定 维生素E又称生育酚，属于酚类化合物。目前已经确认的有四种异构体：α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚。 维生素E的测定方法有：比色法、荧光法、HPLC法等 荧光法 1原理 样品经皂化、提取、浓缩蒸干后，用正己烷溶解不皂化物。在295nm激发波长，324nm发射波长下测定其荧光强度，并与标准α-维生素E作比较，从而计算出样品中维生素E的含量。 2 操作方法 （1）样品处理 称样 皂化瓶 维生素C 无水乙醇 KOH溶液 水 分液漏斗 乙醚 分离 水层 乙醚层 醚层经无水硫酸钠过滤，氮气流真空蒸干 正已烷溶解，定容。 （2）荧光测定 激发波长：295nm 发射波长：324nm 激发狭缝：3nm 发射狭缝：2nm 样品及标准溶液分别置于1cm比色杯，测定荧光激发光谱和发射光谱，读取最大激发波长及最大发射波长下的荧光强度F （3）结果计算 §10.3 水溶性维生素的测定 水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足。 性质： 溶解性：水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙 醚、氯仿等大多数有机溶剂。 稳定性：在酸性介质稳定，既使加热也不破坏； 但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别在 碱性条件下加热，可大部或全部破坏。 易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响， 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光 线破坏 维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。 食品中水溶性维生素的测定 食品中维生素B1的测定 食品中维生素B2的测定 食品中维生素C的测定 食品中烟酸的测定 食品中维生素B6的测定 一、维生素B1的测定 维生素B1又称硫胺素、抗神经炎素。 测定方法：比色法 荧光法（GB/T 12390-1990） HPLC法 1. 荧光法原理 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线下，噻嘧色素发出荧光。在给定的条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光之强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。 本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但不适用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响噻嘧色素荧光物质的样品。　　本方法的最小检出限为0.05μg。 2. 主要试剂 活性人造浮石 硫胺素标准溶液 3. 仪器设备 荧光分光光度计 Maizel-Gerson 反应瓶 盐基交换管 3. 操作步骤 （1）试样处理 样品匀浆（或粉碎）于低温冰箱中冷冻保存。 （2）提取 ①水解 ②酶解 称样 三角瓶 高压水解 盐酸溶液 调pH值 乙酸钠溶液 酶解 淀粉酶 定容 （3）净化 样品 热水 酸性氯化钾 收集酸性氯化钾定容至25ml （4）氧化 静置 → 过滤 → 脱水 反应瓶编号 标准A瓶 标准B瓶 样品A瓶 样品B瓶 加标准液或样品液 标准液5ml 标准液5ml 样品液5ml 样品液5ml 加氢氧化钠 3ml —— 3ml —— 加碱性铁氰化钾 —— 3ml —— 3ml 加正丁醇 10ml 10ml 10ml 10ml （5）荧光强度测定 激发波长365nm；发射波长435nm； 激发波狭缝5nm；发射波狭缝5nm。 4.计算 二、维生素B2的测定 维生素B2又称核黄素 测定方法主要有：微生物法、荧光法、HPLC法 GB/T 12391-1990采用的是微生物法和荧光法。 （一）微生物法 原理：某一种微生物的生长(繁殖)必需某些维生素。例如干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei，简称L.C.)的生长需要核黄素，培养基中若缺乏这种维生素该细菌便不能生长。在一定条件下，该细菌生长情况，以及它的代谢物乳酸的浓度与培养基中该维生