鞘磷脂酶在柯萨奇病毒b3感染心肌细胞中的作用研究心血管内科专业论文.docxVIP

复 旦 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 摘 要 病 毒 性 心 肌 炎 (v iral m y oeard itis，v M C )是 心 血 管 系 统 常 见 病 ，多 发 病 。虽 然 大 多 数 预 后 良好 ，但 约 25 % 一30 % 的 心 肌 炎 患 者 仍 可 演 变 为 扩 张 型 心 肌 病 (dilated cardiom yo p ath y ， D C M )，威 胁 生 命 健 康 ，所 以深 入 探 讨 其 发 病 机 制 将 为 其 临 床 治 疗 措 施 的 改 进 与 发 展 提 供 理 论 支 持 ， 意 义 深 远 。 病 毒 持 续 感 染 诱 发 免 疫 炎 症 反 应 ， 导 致 心 肌 细 胞 凋 亡 坏 死 被 认 为 是 V M C 发 病 的 基 本 机 制 。其 主 要 形态 学特 征 是 心 肌 细 胞 肿 胀 ， 细 胞 膜 破 裂 和 溶 解 ，细 胞 内 炎 症 因 子 等 因 此 得 以 释 放 ，引起 严 重 的 炎 症 反 应 ，因 此 细 胞 膜 是 抵 制 病 毒 侵 袭 的 首 要 屏 障 。鞘 磷 脂 ( S p hing o m ye lin ，S M ) 是 构 成 心 肌 细 胞 膜 的 重 要 骨 架 ，在 还 原 性 辅 酶 2 (n ieotin am id e ad en in e d in u eleotid e p h o sp h ate ，N A D p H ) 和 脂 肪 酞 转 移 酶 作 用 下 ， 脂 酞 C OA 和 丝 氨 酸 在 内 质 网 上 生 成 神 经 酞 胺 (C eram ide ， C er)， C er 接 受 由磷 脂 酞 胆 碱 提 供 的 磷 酸 胆 碱 生 成 S M 。 同 时 ， S M 又 可 经 鞘 磷 脂 酶 (sph in go m y elin ases， S M ases)的 催 化 作 用 ， 水 解 为 磷 酸 胆 碱 和 C er。 S M ases 可 以 分 为 三 大 类 : 酸 性 鞘 磷 脂 酶 (A eid sp hin go m y elin ase ，A S M ase ) ，中 性 鞘 磷 脂 酶 (N eutral S p h in gom y elin ases，N S M ases ) 与 碱 性 鞘 磷 脂 酶 ，己 有 文 献 报 道 A S M ase 与 N s M ases (M gZ+依 赖 性 与 非 依 赖 性 两 种 ， 即 N s M ase一1 与 N s M ase一2 ) 在 心 血 管 系 统 中 表 达 较 高 。 由此 可 见 : 在 S M ases 的 调 节 下 ， S M 合 成 和 催 化 降 解 的 平 衡 是 维 持 心 肌 细 胞 完 整 性 的 重 要 条 件 。 在 病 毒 性 心 肌 炎 的 发 病 中 ， 病 毒 侵 袭 ， 细 胞 膜 的 损 伤 是 否 与 S M aseS 表 达 异 常 有 关 ? 相 关 途 径 是 否 加 速 病 毒 的 入 胞 作 用 ? 是 否 因 此 启 动 细 胞 的 凋 亡 过 程 ? 目前 尚 未 有 相 关 报 道 。另 外 在 迄 今 发 现 的 多 种 可 诱 发 V M C 的 病 毒 中 ，以柯 萨 奇 病 毒 B 3 (C ox saek iev iru s B 3 ， C V B 3) 感 染 最 为 常 见 ， 因此 本 实 验 拟 通 过 观 察 C V B 3 感 染 心 肌 细 胞 后 S M ases ( 主 要 是 A S M ase 与 N S M ases ) 的 m R N A 表 达 水 平 以及 活 性 的 变 化 等 ， 就 S M aseS 在 病 毒 性 心 肌 炎 中 的 作 用 进 行 初 步 探 索 。 第 一 部 分 c v B 3 感 染 心 肌 细 胞 对 s M ascs 表 达 的 影 响 目的 检 测 C V B 3 感 染 心 肌 细 胞 不 同 时 间 点 ， 心 肌 细 胞 A S M ase 与 N S M aseS 的 m R N A 表 达 水 平 以 及 活 性 的 变 化 趋 势 。 方 法 原 代 分 离 、 纯 化 、 培 养 S D 乳 鼠 心 肌 细 胞 ， 待 细 胞 附壁 牢 固 、搏 动 强 而 均 一岁 一止 ( 、_ _ _ 沐 复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 匀 、 活 性 状 态 佳 时 ， C V B : 感 染 心 肌 细 胞 ， 同 时 设 立 正 常 对 照