中华鳖免疫相关基因mavs及trim14的特征、亚时细胞定位及表达分析-水产养殖专业毕业论文.docxVIP

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得堂姿盘堂或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： p科洁 签字日期：九，6年易月f易let 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 堂姿态堂有权保留并向国家有关部门或机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝垄太堂可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 降州i吉 签字日期：知，易年{7月·6日 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 摘要 摘要 中华鳖(Pelodiscus sinensis)是我国重要的淡水养殖品种，具有较高的经济及药用价 值。近年来，随着养殖规模的不断扩大、环境污染的加剧、品种的退化，由疱疹病毒、虹 彩病毒、中华鳖病毒等病原微生物引起的传染性疾病日趋严重，对中华鳖养殖业造成了巨 大的经济损失。中华鳖抗病毒天然免疫机制的研究目前还处在初步阶段，通过研究其免疫 机制，不仅为中华鳖病毒性疾病防治提供了重要的理论基础，而且在爬行动物免疫学方面 具有重要的指导意义。本实验中，我们研究了中华鳖线粒体抗病毒信号蛋白(Mitochondrial antiviral signaling protein。MAVS)及TRIM 1 4(Tripartite motif-containing protein 1 4)基因 在中华鳖组织、不同胚胎发育时期及外源刺激后的表达情况，并通过Western blotting和免 疫组织化学技术研究其在中华鳖小肠组织中的定位及表达情况，探讨了MAVS和TRIMl4 基因之间的关系及其在中华鳖抗病毒天然免疫中的作用。结果如下： 1、经过对中华鳖MAVS基因的结构及同源性分析，发现该基因编码框为2673 bp， 编码890个氨基酸，无信号肽序列，蛋白的分子量和等电点分别为94．6 Kda和5．99，具有 典型的半胱天冬酶招募结构域(Caspase recruitment domain)和跨膜结构域(砌nsmembrane， TM)。RT-PCR和荧光定量实时PCR检测结果显示MAVS基因在鳖的心脏、脾脏、肾脏、 肝脏、食道、胃、小肠、大肠和肌肉中均有表达，其中在心脏、脾脏和肌肉中的表达量较 高；MAVS基因在中华鳖胚胎中的表达量随胚胎发育的不断完善而逐步提高；在受到外源 Poly(I：C)刺激后，小肠、肝脏、脾脏、肌肉组织内MAVS mRNA的表达量显著上调。Western blotting和免疫组化检测结果显示MAVS蛋白在小肠中主要分布于肠道黏膜层，在肠上皮 细胞、固有层中都有阳性细胞，主要在细胞质中表达；经Poly(1：C)刺激后，小肠组织内 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 摘要 的MAVS蛋白表达量显著上升，主要定位在线粒体外膜，也有部分游离在细胞质中。 2、经过对中华鳖TRIMl4基因的结构及同源性分析，发现该基因编码框为1 1 16 bp， 编码371个氨基酸，无信号肽序列，蛋白的分子量和等电点分别为43．2 Kda和8．01，具有 典型的B30．2(PRY／SPRY)结构域。RT-PCR和荧光定量实时PCR检测结果显示TRIMl4 基因在鳖的心脏、脾脏、肾脏、肝脏、食道、胃、小肠、大肠和肌肉中均有表达，其中在 肝脏中的表达量最高；TRIMl4基因在中华鳖胚胎中的表达量随胚胎泼育的不断完善而逐 步提高；在受到外源Poly(I：C)束lJ激后，小肠、肝脏、脾脏组织内TRIMl4 mRNA的表达 量显著上调。Westernblotting和免疫组化检测结果显示TRIMl4蛋白在小肠中主要分布于 肠道黏膜层，在肠上皮细胞、固有层中都有阳性细胞，主要在细胞质中表达；经Poly(I：C) 刺激后，小肠组织内的TRIMl4蛋白表达量显著上升。免疫胶体金结果显示TRIMl4蛋白 位于线粒体外膜。 关键词