1溴丙烷致大鼠大脑神经元凋亡及其机制探讨劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

CONTENTChinese CONTENT Chinese Abstract ． ． ．． ． ． ．． ．． ． ．． ． ． ． ．． ． ． ．． 1 English Abstract ． ． ．． ．．7 Abbrevation ．．．．．．．． ． ． ．． ． ． ．．．13 Introduction ．．1 5 Materials and Methods．．． ．．．．．．．．．．．．．．． ． ． ．． ． ． ． ．．． ． ．． ． ．20 Results．． ．．．．．．．． ．． ． 34 Discussion ． ．．．．．．．． ． ． ．．47 Conclusions．．．． ．．．．．．．．． ．．．．．．．． ． ．53 References ．．．．． ．． ．．．． ．．．．． ． ．． 54 Acknowledgements ．．．． ．．．．．．．．．．． ． ．68 Publication List ．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．． ．． ．．．． ．．69 万方数据 山东大学硕士学位论文1一溴丙烷致大鼠大脑神经元凋亡及其机制探讨 山东大学硕士学位论文 1一溴丙烷致大鼠大脑神经元凋亡及其机制探讨 硕士研究生 杨俊林 导 师 赵秀兰 中文摘要 研究目的 1．溴丙烷(1-bromopropane，1．BP)作为一种臭氧层消耗溶剂如氯氟烃类和某 些致癌物如三氯乙烯、三氯甲烷、四氯乙烯的替代剂而广泛地应用于工作场所中， 主要用途是作为金属、电子元件、光学仪器的清洗剂等。研究显示1-BP能导致 健康损伤，呈现周围神经系统(peripheral nervous system，PNS)毒性如导致感觉 和运动损伤以及中枢神经系统(central nervous system，CNS)毒性如引起抑郁、 焦虑和认知损伤。1-BP中毒病例从1999年至今在美国、日本等地陆续报道，与 其它的神经毒性有机溶剂如正己烷导致的神经中毒病例相比，1-BP中毒病人更 多地表现出CNS毒性症状。迄今为止，1-BP导致CNS损伤的初始靶点和早期 关键事件尚未明确。研究显示在人类慢性神经退行性疾病的起始和进展过程中， 病变大脑中持续存在着逐渐加重的慢性炎症反应，被认为与退行性病变的发生发 展密切相关。在环境神经毒物诱导损伤实验动物的大脑中也观察到明显的炎性变 化。星形胶质细胞(astrocyte，AS)作为大脑内炎性反应的主要介导者，其功能 失调在神经炎症反应中的关键作用受到越来越广泛的关注。但炎性反应是否是 1-BP的主要神经毒性机制尚未见报道。近年来的研究显示，二十二碳六烯酸 (docosahexaenoic acid，DHA)具有很强的抗炎活性，且能穿越血脑屏障，膳食 补充DHA能够明显提高大脑中DHA水平，如若补充DHA能够减轻1-BP的神 经毒性反应可提示1-BP的神经毒性与脑内的炎性反应相关。同时，吡咯烷二硫 代氨基甲酸铵(ammonium pyllrolidinedithiocarbamate，PDTC)是炎性通路中关键 信号分子核转录因子．KB(nuclear transcription factor KB，NF—KB)的特异性抑制剂， 抑制NF．KB激活、阻断炎性反应若能够有效逆转1一BP的神经毒性，可证实炎性 反应在1-BP神经毒性机制中的作用。 万方数据 山东大学硕士学位论文因此，本研究采用经口染毒途径，首先观察了1-BP对雄性Wistar大鼠大脑 山东大学硕士学位论文 因此，本研究采用经口染毒途径，首先观察了1-BP对雄性Wistar大鼠大脑 神经元损伤以及脑内炎性变化的剂量效应关系；进而分别采用具有抗炎作用的 DHA和NF．KB阻断剂，观察了对1．BP导致神经元损伤的逆转情况，从炎症角 度来评价1-BP的CNS毒性及其毒性机制，以期为1-BP以及其它有机溶剂神经 毒性的防控及有效治疗提供理论参考依据。 研究方法 1 1-BP致大鼠大脑损伤的剂量效应关系 60只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、100、200、400、800 mg／kg·bw 1．BP 剂量组，每组12只。动物适应性喂养5天后，将1-BP溶于玉米油，经口灌胃给 予相应剂量的1．BP，对照组经口灌胃给予等体积的玉米油，每天1次，连续13 天。 病理形态学检测：每组随机选取4只动物麻醉后，行心脏灌注，制备大脑冰 冻切片，分别进行免疫组化和TUNEL染色。免疫荧光双染色观察大鼠大脑前额 叶皮质(prefrontal cortex，PFC)中神经元和AS的变化情况，TUNEL染色检测 PFC中细胞的凋亡。 Western blot：水迷宫实验结束次日晨