肠道菌群失衡对小鼠恶黑肿瘤发生率的影响及益生菌对肿瘤发生的抑制作用生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行 独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行 的研究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 茎缝 签字日期：竺生年—二月一三￡日 万方数据 关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 关于学位论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于(请在以下相应方框内打“4”)： 1．保密口，在 年解密后适用本授权书。 2．不保密母／ 作者签名：多汐参 日期：．M()年厂月艿日 导师签名： 砑江 日期纵伊p忻 1 万方数据 目 目 录 一、摘要 ．．1 (一)中文摘要 ．1 (二)英文摘要 ．．3 二、正文 ．．6 (一)前言(一)日IJ舌 ．．6． (二)材料和方法 ．．7 1．材料 ．． ．7 1．1实验动物 ．．7 1．2 B16黑色素瘤细胞株 7 1．3细胞培养器材及试剂 ．．8 1．4质粒与菌种 ．8 1．5主要实验仪器及设备 8 1．6主要实验试剂 ．．8 1．7主要实验试剂及溶液的配制 9 2．方法 一 ．9 2．1 B16黑色素瘤细胞培养 9 2．2 C57BL／6小鼠模型的建立 ．．1 1 2．3动物模型肠道菌群分析 ．1 1 2．4小鼠结肠HE染色切片 一1 8 2．5小鼠免疫组织化学 ．． ．20 万方数据 (三)结果 (三)结果 ．．23 3．实验结果 23 3．1小鼠黑色素瘤成瘤情况及成瘤率 ．．23 3．2利用PCR技术对肠道菌群16S rRNA基因进行扩增 23 3．3 PCR．DGGE 24 3．4小鼠结肠组织HE染色切片． ．27 3．5小鼠免疫组织化学 ．28 (四)讨论 ．．31 (五)结论 ．．34 (六)参考文献 ．．34 三、文献综述 38 (一)综述正文 ． ． ．．38 (二)参考文献 ．42 四、致谢 48 万方数据 大连医科大学硕士学位论文肠道菌群失衡对小鼠恶黑肿瘤发生率 大连医科大学硕士学位论文 肠道菌群失衡对小鼠恶黑肿瘤发生率 的影响及益生菌对肿瘤发生的抑制作用 硕士生姓名：张鑫 指导教师：辛毅教授 专业名称：生物化学与分子生物学 捅 要 抗生素，可以帮助人类有效地杀灭很多对威胁人类及动物生命安全的细菌、 病毒、真菌等。然而，不科学地使用抗生素，非但不会帮助人类解决难题，有时 甚至适得起反，引发神经毒性、肝肾毒性、肠道菌群失调等一系列的健康问题n1。 研究表明，肠道菌群失调会对人体健康造成各种有害的影响。肠道菌群在正常的 条件下，组成了人体肠道的生物学屏障，可以有效抵抗外来的有毒有害物质，并 在人体中发挥着免疫调节作用。当人体长期使用抗生素后，会出现肠道缺乏维生 素，菌群失衡等问题，进而使肠道菌群无法继续完成免疫防御的作用，造成人体 免疫力下降。而健康膳食及微生态制剂，包括酸奶，合生元等，其中所含有的乳 酸杆菌、双歧杆菌嗜酸乳杆菌等有益菌可以提高人体免疫力。然而，如何提供一 个直接证据，证明抗生素能够降低免疫力，益生菌提高免疫力，将有利于将机制 研究引向深入。基于此种想法，本课题拟探索抗生素和益生菌对肠道菌群的影响， 进而通过肿瘤发病率反映出它们对免疫力的影响。 目的：建立小鼠恶黑肿瘤发病率的客观指标，以发病率的高低显示肠道菌群 紊乱对肿瘤发生的促进作用，以及证明益生菌通过修复肠道菌群来抑制肿瘤的发 生，为健康的肠道菌群能够提高免疫力、抑制肿瘤发生的观点提供直接证据。 方法：左氧氟沙星，属于喹诺酮类别的抗生素，具有较强的广谱抗菌作用。 本实验采用该抗生素给C57BL／6小鼠口服灌胃，构建一个抗生素引起的小鼠肠道 菌群失衡模型。为建立小鼠肿瘤模型，向小鼠皮下注射恶黑肿瘤细胞，确定能产 生实体瘤的最低肿瘤细胞数量，此细胞数即为能否诱导瘤发生的阈值。当移植的 肿瘤细胞数量低于该阈值时，如果产生了实体瘤，显示免疫力水平低下。分别取 万方数据 大连医科大学硕士学位论文对照组、抗生素处理组、抗生素处理后自我恢复组、益生菌恢复组小鼠的粪便， 大连医科大学硕士学位论文 对照组、抗生素处理组、抗生素处理后自我恢复组、益生菌恢复组小鼠的粪便， 提取