基因工程的运输工具.ppt

想一想:DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 质粒 达标练习 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 基因工程常用的受体细胞有（ ） (1)大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3） * 2 .基因的针线──DNA连接酶 　　 切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？ DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ 阅读思考： 作用：将双链DNA片段缝合起来恢复被限制酶切开 的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 种类：E.coliDNA连接酶：来源与大肠杆菌 T4DNA连接酶：来源与T4噬菌体 差别：E.coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接; T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低. DNA扩增复制 用于基因的表达载体的构建 作用 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 答：不是一回事。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成），那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？ （1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 （2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 巩固练习 总结规律 限制酶所识别的序列有什么特点？ 无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： (1) …CTGCA??? (2) …AC??? (3) GC… ?? …G??????????? …TG??????? CG…（4） …G????? (5)????G…? (6) …GC ????? …CTTAA???? ACGTC…????? …CG (7) GT…???????(8)AATTC… ???? CA…????????????? G… 你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？ 3基因进入受体细胞的载体------“分子运输车” 1；作用；a作为运输工具，将目的基因导入受体细胞中去 b利用他在受体细胞内对目的基因进行大量的复制 2；载体必修具备的三个条件 a能在受体细胞内稳定保存并大量复制 b有一至多个限制酶切割位点 c有特殊的遗传标记基 d必须是安全的,大小要合适 便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 3、基因的运输工具——运载体 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 作为载体的必要条件 能自我复制 有切割位点 能与目的基因结合 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达； 有遗传标记基因 对受体细胞无害 比较容易得到 3分类 常用的运载体： 质粒、一种裸露的,结构简 单独立于细菌染色体 之外,并具有自我复制能力的 双链环状DNA分子. 噬菌体 动、植物病毒等 一般来说，太然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和要求，对某些天然的载体进行人工改造 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 要对天然质粒进行人工改造 1、下列不适合用于基因工程的运载体 是（ ） A、质粒 B、噬菌体 C、细菌 D、病毒 选我 C 2、下列说法正确的