氰化高铁血红蛋白测定法..pptVIP

(HGB);氰化高铁血红蛋白测定法 原理： 血液中除硫化红蛋白(SHb)外的各种血红蛋白(如氧化血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物)均可被高铁氰化钾氧化称高铁血红蛋白，再与氰离子(CN-)结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白，氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有一个较宽的吸收峰，它在540nm处的吸光度同它在溶液中的浓度成正比，常规测定可以从HiCN参考液制作的标准曲线上读取结果。;氰化高铁血红蛋白测定法 方法学评价 是国际血液学标准化委员会推荐的参考方法，该法操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。其致命的弱点是氰化钾试剂中剧毒，使用管理不当会造成公害。;试剂;检测步骤 制备标准曲线 将市售氰化高铁血红蛋白(HiCN)参考液稀释为四种浓度(200g/L、100g/L、50g/L、25g/L)，然后以HiCN试剂调零，分别测定各自在540nm处的吸光度，以血红蛋白浓度(g/L)为横坐标、绘制标准曲线。;常规检测操作 ⑴ 取小试管1支，加入HiCN试剂5ml； ⑵ 用清洁干燥微量吸管准确吸取末梢静脉 血20ul；擦去管外余血，将吸管插入小试管中稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液，清洗吸管2-3次，混匀； ⑶ 静置5分钟后，测定待测标本在540nm下的吸光度； ⑷ 查标准曲线求得血红蛋白含量。;计算公式 血红蛋白(g/L)=测定管吸光度×64458/44000 ×251 =测定管吸光度×367.6 式中：64458为目前国际公认的血红蛋白平均分子量 44000为1965年国际血液学标准化委员会公布的 血红蛋白摩尔吸光系数。 251为稀释倍数;生物参考区间 成年男性 131-172 g/L 成年女性 113-151 g/L 新生儿 180-190 g/L 婴儿 110-120 g/L 儿童 120-140 g/L 警告值(危机值) Hb＜50 g/L 或 ＞ 250 g/L;贫血程度划分 轻度 Hb 正常下限 —91 g/L 症状轻微； 中度 Hb 90-60 g/L 体力劳动时心慌气短； 重度 Hb 60-31 g/L 休息时感觉心慌气短； 极重度 Hb ≤ 30 g/L 常合并贫血性心脏病。;注意事项 HiCN试剂应贮存在棕色的有塞的玻璃瓶中，不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测定结果偏低 HiCN试剂应在4℃保存，不能0℃保存，因结冰可使试剂失效 白细胞过高或球蛋白异常增高时，可产生浓度干扰实验 氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应除毒处理后再弃去;质量控制 HiCN试剂应4℃保存，否则试剂失效，直接影响检测质量 试剂应保持新鲜，至少一个月配制一次 样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时，可干扰实验，解决方法是：白细胞过高，离心后取上清液比色；球蛋白异常增高(如肝硬化者)，比色液中加入少许固体氯化钠或碳酸钾，混匀后溶液澄清后再比色;血红蛋白 （HGB） ;血红蛋白 （HGB） ;结果分析 测定值假性增高 稀释倍数不准确 红细胞未完全溶解 血浆中脂质或蛋白质量增加 ;废液处理 氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应首先以水稀释(1:1)，再加次氯酸钠35ml/L，充分混匀，放置15小时以上，使CN-氧化成CO2和N2挥发，再排入下水道，废液不能直接与酸性溶液混合，避免产生剧毒的氰氢酸气体