农作物种子检测中常用电泳方法比较分析.PDFVIP

2018年第11期 专题论述 35 农作物种子检测中常用电泳方法的比较分析 郑戈文 （山西省农业种子总站，太原030006 ） 摘要：种子质量是农业生产的重要因素，质量检测是其中的关键环节，随着种子检测技术的发展，电泳方法越来越多地应 用到种子质量检测中。目前在农作物种子质量检测中常用的电泳方法有4 种，不同电泳方法的要求和适合的检测项目不同， 针对各种电泳方法的优缺点，讨论其适用范围，从而为农作物种子质量检测技术平台提供参考。 关键词：农作物种子检测；电泳方法；比较分析 种子是农业生产的基本资料，种子质量的优劣 DNA 片段分离开[2] 。小板聚丙烯酰胺凝胶通常用 关系到国计民生，种子质量检测是把好种子质量关 电泳仪和小板电泳槽进行电泳。 的重要手段。随着检测技术的不断发展，电泳技术 1.3　大板聚丙烯酰胺凝胶电泳　大板聚丙烯酰胺 在种子质量检测中发挥着越来越大的作用。电泳是 凝胶电泳原理同小板聚丙烯酰胺凝胶电泳，只是 指在电场作用下，带电颗粒向与其电性相反电极移 单体和交联剂的比例不同，形成大小不同的立体 动的现象。电泳技术是利用带电颗粒在电场作用下 网状结构，胶更薄、移动距离长，能将小片段DNA 移动速度不同而实现分离的技术。在农作物种子质 （5~500bp ）分离开，甚至相差2~5bp 的DNA 片段也 量检测中常会用到4 种不同的电泳方法：琼脂糖凝 能区分开。根据Marker 或者参照样品DNA 谱带的 胶电泳、小板聚丙烯酰胺凝胶电泳、大板聚丙烯酰胺 位置，可以估测出被检样品DNA 片段的大小。大板 凝胶电泳和毛细管电泳。不同的电泳方法适合不同 聚丙烯酰胺凝胶电泳需要高压电泳仪和大板垂直电 的检测项目，各方法对实验仪器、检测技术水平、实 泳槽进行电泳。 验室条件和操作人员的要求也不同。 1.4　毛细管荧光电泳　毛细管荧光电泳是将胶灌 1　四种不同的电泳方法 在一种空芯的微细毛细管中，利用电泳和电渗流的 1.1　琼脂糖凝胶电泳　琼脂糖凝胶电泳是分子 电动力学原理，把PCR 产物高效分离，利用荧光检 检测中常用的检测方法，不同浓度的琼脂糖凝胶 测到产物信号，通过软件分析系统转化成峰值图导 （0.3%~1.5% ）可以将200bp~50kb 的DNA 片段分离。 出结果的电泳技术。毛细管电泳检测方法可以将相 当用溴化乙啶（EB ，荧光嵌入染料）染色，通过凝胶 差 1bp 的DNA 片段分离开，通过不同的峰值图展示 成像系统，能观察到发出荧光的DNA 条带，确定 出来，经过参照样品和基准物质的矫正，获得相对精 DNA 片段在凝胶中的位置及质量，或与参照DNA 确的数据。在引物上标记不同的荧光信号，可以将 比较，判定被检基因的有无。琼脂糖凝胶电泳可以 若干组不同的PCR 产物放在同一个反应孔中电泳， 检出 1~10ng 的DNA 的存在[1] 。通常实验室多用电 根据荧光信号颜色的不同和PCR 产物大小的不同， 泳仪和水平槽装置进行琼脂糖凝胶电泳。 分析出一个样品在不同位点的特性值[3] 。毛细管荧 1.2　小板聚丙烯酰胺凝胶电泳　聚丙烯酰胺凝胶 光电泳通常在基因分析仪上进行。 电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为支持物的一种电泳。聚 2　不同电泳方法适合不同的检测项目 丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N ，N ’- 琼脂糖凝胶电泳在农作物种子质量检测中多用 甲叉双丙烯酰胺（简称Bi