氧化葡萄糖酸杆菌老黄酶Go酶学性质鉴定.PDFVIP

第 １５卷第 １期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１５ Ｎｏ１ ２０１７年１月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊａｎ． ２０１７ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１７０１００４ 氧化葡萄糖酸杆菌老黄酶Ｇｏ 的酶学性质鉴定 陈晶晶，盛茜茜，钱姝文，严　 明，许　 琳 （南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京 ２１１８００） 摘　 要：从氧化葡萄糖酸杆菌（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ）Ｈ２４ 中克隆出老黄酶Ｇｏ 的基因，通过构建重组表达质粒，在 大肠杆菌ＢＬ２１中诱导表达可溶性的蛋白，使用离子交换柱（ＨｉＴｒａｐ ＤＥＡＥ ＦＦ）对重组酶进行纯化，并对其酶学性质 进行表征。 结果表明：老黄酶Ｇｏ 的温度和ｐＨ耐受性都较好，在４０ ℃条件下，１２ ｈ后能保持４０％的活性；在ｐＨ１０ 的条件下，１２ ｈ后能保持４０％的活性；Ｇｏ 的底物谱十分广泛，对酰亚胺类、α，β 不饱和醛酮、萜类都有一定的活性。 老黄酶Ｇｏ有良好的有机溶剂耐受性，在体积分数２０％的乙酸丁酯中可以保持９０％左右的活性，但是金属离子对其 ２＋ ＋ 影响较大，除Ｍｇ 和Ｋ 外，所选的其他离子对Ｇｏ都有着不同程度的抑制作用。 最后，在催化性质的实验中发现， Ｇｏ对柠檬醛的转化率有６０％，并且其对映体过量值（ｅｅ．）可以达到９９％。 关键词：老黄酶；不对称还原碳碳双键；氧化葡萄糖酸杆菌Ｈ２４；酶学性质 － － － 中图分类号：Ｑ５５４　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１７）０１ ００２０ ０８ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｏｌｄ ｙｅｌｌｏｗ ｅｎｚｙｍｅ ｆｒｏｍ Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ Ｈ２４ ＣＨＥＮＪｉｎｇｊｉｎｇ，ＳＨＥＮＧ Ｘｉｑｉａｎ，ＱＩＡＮ Ｓｈｕｗｅｎ，ＹＡＮ Ｍｉｎｇ，ＸＵ Ｌｉｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｏ，ａ ｎｏｖｅｌ ｏｌｄ ｙｅｌｌｏｗ ｅｎｚｙｍｅ ｆｒｏｍ Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ Ｈ２４，ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ＢＬ２１（ＤＥ３）．Ｔｈｅｎｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ａｆｔｅｒ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ＨｉＴｒａｐ ＤＥＡＥ ＦＦ ｃｏｌｕｍｎ． Ｇｏ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ ｖａｒｉｏｕｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ａｌｋｅｎｅｓ ｉｍｉｄｅｓ，α，β⁃ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｋｅｔｏｎｅｓ， ａｎｄ ｔｅｒｐｅｎｅ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｈｉｇｈ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ （ｒｅｔａｉｎｉｎｇ ４０％ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ，４０ ℃ ｆｏｒ １２ ｈ） ａｎｄ ｐＨ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ （ｒｅｔａｉｎｉｎｇ４０％ ａｃｔｉｖｉｙ，ｐＨ １０ ｆｏｒ １２ ｈ），ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｉｔ ｈａｓ ａ ｇｒｅａｔ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ． Ａｌｓｏ，ｉｔ ｓｈｏｗｓ ｈｉｇｈ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏｗａｒｄ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ａｎｄ ｍａｉｎｔａｉｎ ９０％ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ２０％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ． Ｈｏｗｅｖｅｒ，Ｇｏ ｈａｓ ｌｏｗ ｔｏｌｅｒ