多胺对小菜蛾行为和卵黄蛋白合成的影响农业昆虫与害虫防治专业论文.docxVIP

华中农业大学2006届硕士论文摘要 华中农业大学2006届硕士论文 摘要 多胺(Polyamines)如腐胺(putrescine)、亚精胺(spermidine)及精胺(spermine)是一类 带正电荷的小分子脂肪族化合物，广泛存在于原核和真核细胞内。目前的研究表明， 多胺对生物大分子的合成，细胞的生长、分化等有重要的调节作用，可参与调节昆 虫的生长发育等多种生理过程。但由于昆虫生理过程及多胺代谢过程的复杂性，多 胺对昆虫生理过程的调节机理还不清楚。因此，研究多胺在小菜蛾行为及卵黄蛋白 合成中的作用，对于迸一步明确多胺生理功能，阐明多胺参与昆虫生理过程的机理 具有重要意义。本文以小菜蛾Plutellaxylostella L为研究对象，通过行为选择反应、 触角电位(EAG)反应以及触角可溶性蛋白变化的研究，探讨了多胺在小菜蛾行为选 择过程中的功能；在建立了昆虫体内多胺的高效液相色谱(HPLC)澳IJ定方法的基础 上，研究了外源多胺和激素与小菜蛾蛹期多胺代谢的相互关系；最后通过电泳和免 疫技术，分析了多胺和激素与小菜蛾卵黄蛋白合成之间的关系。主要研究结果如下： (1)多胺对小菜蛾行为的影响 与对照蒸馏水相比，小菜蛾在交配前和交配后对精胺(spm)、亚精胺(spd)和腐胺 (put)这3种多胺均有明显的趋性反应，但对3种多胺两两之间的选择则无显著差异； 在对3种多胺和甘蓝BrassicaoleraceaL叶汁之间的选择中，除未交配雄蛾对腐胺有 明显的趋性(与甘蓝叶汁比较)和交配后雌蛾对甘蓝叶汁有明显的趋性(与精胺比较) 外，其他均没有显著差异。结果表明多胺对小菜蛾具有引诱作用。 与对照蒸馏水比较，小菜蛾在交配前和交配后对spin、spd和put这3种多胺均 有明显的EAG反应；但与甘蓝叶汁相比，除对0．1％spd的FAG反应和未交配小菜 蛾雌蛾对0．1％put的EAG反应明显较高，对其它浓度多胺的EAG反应明显较低； 对不同浓度多胺之间的比较发现，小菜蛾对低浓度(0．1％)多胺的EAG反应明显高于 对高浓度(1％)多胺的FAG反应。 3种多胺(put、spd和spin)和多胺抑制剂2．氟甲基鸟氨酸(DFMO)处理‘。明显改 变了未交配和已交配小菜蛾对甘蓝叶汁以及不同浓度多胺(put、spd和spra)的EAG 反应。与spin和Dut相比，spd对小菜蛾触角活性的影响最大．与丙酮对照相比，多 胺和DFMO处理后，雄性小菜蛾对雌性性信息素的FAG反应也明显改变，put和spd 处理后明显减弱了雄性小菜蛾对雌性性信息素的FAG反应，DFMO稍微减弱，而 spin则增强了雄性小菜蛾对雌性性信息素的EAG反应。进一步研究表明，3种多胺 和DFMO处理后影响小菜蛾触角可溶性蛋白的合成，而且经过spd处理后，雌性小 菜蛾触角中出现了一条llOkD左右的特异带。 (2)多胺和激素对小菜蛾蛹期多胺含量的影响 建立了丹磺酰氯柱前衍生高效液相色谱(HPLC)快速测定昆虫体内多胺含量的方 ●．多胺对小菜蛾行为和卵黄蛋白合成的影响 ●． 多胺对小菜蛾行为和卵黄蛋白合成的影响 法：以C18(250x4．6mm，舡m)为固定相，甲醇和水为流动相，梯度洗脱，柱温40C， 流速lml_／min，荧光检测波长：激发波长(Ex)：280nm，发射波长(EIn)：515nm，测 得put、spd和spm3者回收率分别为98．7％、99．2％、97．8％，回归方程线性良好“ 值均大于0．99)，分析时间为16min。 小菜蛾蛹期3种多胺(put、spd和spm)的代谢呈现明显的动态变化；外源多胺及 DFMO处理后对蛹体内3种多胺的代谢产生了明显的影响，进一步分析表明这种影 响具有一定的时效性；保幼激素类似物法尼醇和20．羟基蜕皮酮(20E)对蛹体内3种 多胺的合成具有一定的促进作用，而在相同的发育阶段，20E的促进作用总体上要 高于法尼醇的效应。 (3)多胺对小菜蛾产卵量的影响 饲喂put、spd和spm水溶液后，小菜蛾产卵量明显低于蔗糖对照，但明显高于 不取食任何食物的产卵量；饲喂put和蔗糖的混合溶液后，小菜蛾产卵量极显著高 于蔗糖对照，spd和蔗糖混合溶液及slam和蔗糖混合溶液则显著高于蔗糖对照，且 处理组各时期的产卵量均高于蔗糖对照，产卵期均延长。 (4)多胺对小菜蛾卵黄蛋白合成的影响 SDS—PAGE电泳实验证实，小菜蛾卵黄蛋白由2个120kD左右、1个80kD和 1个65kD4个亚基组成：免疫反应证明，卵黄蛋自在雌性4龄幼虫和成虫中均存在， 而在雄性小菜蛾幼虫、蛹、成虫以及雌性3龄幼虫体内均不存在，说明小菜蛾卵黄 蛋白合成起始于4龄幼虫。 建立了小菜蛾卵黄蛋白的火箭免疫电泳检测法，在此基础上研究了多胺、保幼 激素类似物法尼醇和20E对小菜蛾卵黄蛋白合成