研究生-干细胞.pptVIP

* （四）人ES细胞的鉴定方法 ES细胞形态学鉴定：形态结构和生长特性 2 核型分析：具有正常二倍体核型 3 碱性磷酸酶染色 4 SSEA免疫荧光标记 5 分化能力检测 * （1）体外分化试验 （2）体内分化试验 （3）嵌合体形成 5 分化能力检测 * （1）体外分化试验 将所得细胞系制成悬液培养， 若为ES细胞，则部分细胞贴壁， 分化为神经肌肉软骨等不同组织细胞， 部分细胞悬浮生长， 形成简单类胚体和囊状胚体 * 将获得的一定量的细胞 注射到同源动物的皮下， 　 若该细胞为ES细胞，则经过一段时间后， 动物皮下注射处有组织瘤生成， 取瘤切片可见代表三个胚层的不同组织细胞 （2）体内分化试验 * （3）嵌合体形成 将ES细胞注射或聚合至受体胚胎， 再将该胚胎植入同期化受体 * 二 人ES细胞的应用前景与展望 （一）临床医学 （二）发育基础研究 （三）药物测试 * （一）临床医学 全能性的ES细胞是 细胞、组织甚至器官移植 供体的理想来源 血液系统疾病 2 神经系统疾病 3 肝脏疾病 * 1 血液系统疾病 ES细胞 体外诱导 造血干细胞 各种血细胞 T细胞 B细胞 （造血功能重建） （免疫重建） * 2 神经系统疾病 ES细胞 体外诱导 神经胶质前体细胞 神经前体细胞 成熟神经元 （移植治疗髓鞘缺陷大鼠） （治疗神经系统退行性疾病） * 3 肝脏疾病 将ES细胞植入肝功能不全 或肝硬化患者体内 * （二）发育基础研究 对胚胎干细胞进行基因打靶， 评估体外分化能力，直接探查基因功能 （ES细胞系的体外可操作性且 不会引起与胎儿试验相关联的伦理问题） * （三）药物测试 ES细胞具有组织、细胞的广谱性， 它发展为胚体后生物系统， 　可模拟体内细胞与组织间复杂的相互作用， 可作为评价新药及化学产品毒性及效能的检测系统， 可减少动物检测，降低成本， 具有重要的商业价值。 * 三．ES细胞研究尚需解决的问题 （一）定向诱导分化ES细胞为特定类型的功能细胞 （二）定向诱导分化ES细胞为由功能的器官 　 2 离体器官的保存问题 （三）定向诱导分化的可调性 （即ES细胞移植后的成瘤性问题） （四）组织相容性问题 （即移植排斥反应问题） （五）ES细胞的遗传学稳定性问题 （即DNA复制过程中的基因突变问题） 1 分化成器官的技术问题 * 复习题 试述间充质干细胞的生物学特性及应用前景. * * 第三节 间充质干细胞 * （一）分离培养特性 （二）表型特征 （三）自我更新及可塑性 一　MSC的生物学特性 * （一）分离培养特性 20世纪70年代, Fredenstein 等 首先成功地从骨髓中分离出MSC 全骨髓标本 分离方法： 培养 约2４h后 未黏附细胞：造血干细胞、 造血后代细胞 黏附细胞：即为MSC呈纺锤形 间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）是中胚层发育的早期细胞 脂肪、皮肤 * （二）鉴定 形态 表型 中胚层分化 * 二 分化潜能 （一）MSC的成骨分化 （二）MSC的软骨分化 （三）MSC的成脂分化 （四）MSC的成肌分化（用5-氮胞苷诱导） （五）MSC的成肝分化 （六）MSC的神经分化 * （一）MSC的成骨分化 1994 年，Richard等： 10 -8M地塞米松 ＋重组BMP-2 成骨细胞 MSC 1997年Jaiswal 等优化了成骨诱导体系， 发现在DMEM中加入 100mM地塞米松 0.05 mM抗坏血酸-2- 磷酸盐 10mMβ-磷酸甘油 效果最好 * （二）MSC的软骨分化 体外诱导： 体内实验： 自体MSC 促进半月板等软骨中