(蓝白斑筛选)lACZβ半乳糖苷酶.pptVIP

* * 阳性克隆的快速检测 一、实验目的 学习蓝白斑筛选试验中阳性克隆的快速检测方法 掌握蓝白斑筛选的原理和方法 二、蓝白斑筛选的原理 重组质粒转化细菌后，蓝白斑筛选往往是基于抗生素筛选基础上的第二次筛选。 一般培养转化细菌的培养基中都要加入一定浓度的适宜抗生素，只有含有质粒载体的细菌才可以生长形成菌落，即抗生素完成对细菌是否含有质粒载体进行了初步筛选。 质粒载体上存在的LacZ基因片段当被外源DNA片段插入时，会产生白色的克隆，不含插入片段的质粒进入宿主细胞生成蓝色菌落。这就是蓝白斑筛选，即a-互补显色反应 lacZ β-半乳糖苷酶 分解乳糖 i P O 调控蛋白P 大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因lacZ系统 a-互补显色反应（蓝白斑筛选） lacZ - β-半乳糖苷酶- 分解乳糖 i P O 调控蛋白P α-肽段 分解X-gal 产物呈现蓝色 诱导剂IPTG β-半乳糖苷酶基因lacZ突变体M15 三、实验材料、器具及药品 　　 实验器具　　1.5ml Ep管，离心管架，微量取液器，台式高速离心机，恒温振荡摇床，电泳仪，紫外透射检测仪。 实验材料 　　LB固体培养基上生长的蓝白菌斑 实验药品 1. 溶液Ⅱ 0.4mol/L NaOH 2%SDS 临用前1:1混合贮存液即为II液. 2. 分离液 酚/氯仿/异戊醇＝25:24:1 3. 1%琼脂糖凝胶 *