转基因水稻潮霉素标记基因PCR检测方法的建立-中国食品卫生杂志.PDF

论著 转基因水稻潮霉素标记基因PCR 检测方法的建立 及其在基因水平转移研究中的应用 1 ,4 1 1 2 3 沈立明 　吴永宁 　周萍萍 　张建中 　魏晓丽 ( 1 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 ,北京 　100050 ; 2 中国疾病预防控制中心传染 病控制所 ,北京 　102206 ;3 中国科学院遗传与发育生物学研究所 ,北京 　100101 ; 4 贵阳医学院公共卫生学院 ,贵州 　贵阳　550001) 摘 　要 :为建立用于基因水平转移研究 , 尤其是 DNA 经加工和消化后稳定性研究的针对转基因水稻潮霉素标记基 因 hpt (hygromycin phosphotransferase) 的定性和实时定量 PCR 体系 ,设计针对 hpt 的上游通用引物多个片段定性 PCR ( ) 扩增体系 , 以植物叶绿体基因 rbcl 为内对照 ,PCR 扩增产物经测序验证 。将定性 PCR 中最小片段 236 bp 连接到质 粒载体 pUC18pMD T 载体上 ,提取质粒经验证后做外标 。应用 TaqMan —MGB 荧光探针和引物 ,建立定量的外标校 正曲线法 ,并评价方法的精密度 。建立的定性 PCR 体系能稳定扩增出236 bp ～910 bp 不同大小的 5 个 hpt 片段 ,并 5 ( 2 ) 经测序验证 。实时定量 PCR 的线性范围为 10 ～10 拷贝 R = 0998 ,最低能检出 10 拷贝 ,重复性好 。本研究已成 功建立了用于转基因水稻标记基因 hpt 基因水平转移研究的定性和定量 PCR 系统 。 关键词 :植物 ,转基因;基因;基因水平转移 ;聚合酶链反应 Development of PCR Detection System for Marker Gene Hygromycin Phosphotransferase ( hpt) in Transgenic Rice and Its Application SHEN Liming , WU Yongning , ZHOU Pingping , ZHAN G Jianzhong , WEI Xiaoli (National Institute for Nutrition and Food Safety , Chinese CDC , Beij ing 100050 , China) Abstract : Qualitative and realtime quantitative PCR methods were developed to facilitate the investigation of the persistence of hpt gene within transgenic rice in different processed foods and degradation test in vitro and in vivo . Using rbcl gene fragment as inner positive control , a fragmentmultiplex PCR system was established to detect fragments of the hpt gene of genetically modified rice with