牛传染性鼻气管炎可视化LAMP检测方法的建立和应用-微生物学报.PDF

生 物 工 程 学 报 董世娟 等/牛传染性鼻气管炎可视化LAMP 检测方法的建立和应用 1587 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Oct. 25, 2018, 34(10): 1587−1595 DOI: 10.13345/j.cjb.180008 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·动物及兽医生物技术· LAMP * * 董世娟 ，冯蒙 ，于瑞嵩，谢春芳，陈冰清，李震 201106 , , , . LAMP . , 2018, 34(10): 1587–1595. Dong SJ, Feng M, Yu RS, et al. Establishment and application of visual LAMP detection method of infectious bovine rhinotracheitis virus. Chin J Biotech, 2018, 34(10): 1587–1595. 摘 要: 根据牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV ）gB 基因保守序列（GenBank Accession No. DQ006857.1 ），利用Primer Explorer V4 软件设计 3 对LAMP 引物，通过反应体系的优化、敏感性试验和特异性试验，建立IBRV 的LAMP 检测方法，并对 393 份临床样本进行了检测应用。结果显示，建立的IBRV LAMP 方法在65 ℃、50 min 条件下 可扩增出LAMP 特征性梯状条带，并可通过颜色变化判定结果。该方法可以检测到 10 copies/μL 的质粒DNA ， 与nested-PCR 方法的敏感性相当，比PCR 方法敏感 1 000 倍，且与牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病毒、水泡口 炎病毒等均无交叉反应。应用该方法检测301 份鼻腔拭子和92 份血清样本，阳性率分别为 87.6%和58.8% ，表明 鼻腔棉拭子更适用于IBRV 的临床检测。文中建立的IBRV LAMP 方法具有可视化、快速、特异、灵敏性强的优 势，适合基层和现场对临床样本进行快速检测，为IBR 的防控提供了技术支撑。 : 牛传染性鼻气管炎病毒，环介导等温扩增方法，gB 基因 Establishment and application of visual LAMP detection method of infectious bovine rhinotracheitis virus * * Shijuan Dong , Meng Feng , Ruisong Yu, Chunfang Xie, Bingqing Chen, and Zhen Li Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding, Animal Husbandry and Veterinary Institute, Shanghai Academy of Agricultural Sciences , Shanghai 201106, China Abstract: Three pairs of primers were designed according to the conserved region of IBRV gB gene published in GenBank(GenBan