瞬时转染原理和实验步骤.PDFVIP

活性蛋 白整体 方案 Active Protein Solutions 瞬时转染原理及实验步骤 哺乳动物细胞瞬时转染能在短期内快速表达高活性蛋白而被广泛应用。本文主要介绍了细胞瞬时转染的步骤、 原理 ，及血球计数板对细胞计数的原理和方法。 哺乳动物细胞自身具有蛋白折叠和翻译后修饰的功能 ，获得的蛋白更具有天然活性。哺乳动物细胞生产蛋白的 方式有两种 ：瞬时转染和稳定转染。瞬时转染的特点是短期快速表达 ，满足蛋白的小量制备。而稳定转染通过构建 稳定细胞系能够满足蛋白的大量、长期生产。 瞬时转染是指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内（主要指 HEK293细胞 ），该质粒上的外源 基因不整合到细胞自身的基因组上。随着细胞的生长分裂 ，外源基因会逐渐丢失。质粒在细胞内能够存在 3-4 天 ， 此时间内 ，质粒外源基因在细胞内发生转录翻译 ，得到极为少量的蛋白。这一整个快速转染得到蛋白的过程就称为 瞬时转染表达。 瞬时转染步骤