课件：第十六章 胰腺疾病检验.ppt

谢 谢！ 淀粉酶（α-amylase，AMY）又称α-1,4-葡聚糖水解酶，作用于多糖分子的α-1,4-糖苷键，生成麦芽糖和葡萄糖。淀粉酶分子量约为40000～50000，很易由肾脏排出。α-淀粉酶主要存在于胰腺、唾液腺及其分泌液中，对食物中多糖化合物的消化起重要作用。血清淀粉酶主要有两种同工酶，即同工酶P（来源于胰腺）及同工酶S 淀粉酶 淀粉酶是临床应用最早的酶，测定方法多达200余种 一般可将这些方法归纳为二类： 一类是以天然淀粉为底物的测定法。由于天然淀粉的分子结构和葡萄糖组成不确定，难以达到方法学标准化，测定的准确性和重复性都较差 另一类是使用分子组成确定的小分子寡聚糖或对-硝基苯酚-糖苷等作为淀粉酶底物，与辅助酶、指示酶共同组成淀粉酶测定系统。此类方法最突出的优点是底物的结构、分子量和水解产物确定，方法简便快速，精密度好，线性范围宽，是目前测定淀粉酶较为理想的方法 淀粉酶的测定 血清(或血浆)中α-淀粉酶（AMY）催化淀粉分子中α-1,4-糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1,6-糖苷键支链的糊精。在底物过量且浓度已知的条件下，保温反应到规定时间后加入含强酸的碘液终止反应，并与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物（碘色反应），其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而计算出AMS的活力单位 碘－淀粉比色法 实验原理 以对－硝基苯麦芽庚糖苷（4NP-G7）为底物，经α-淀粉酶催化，水解为游离的寡糖(G5，G4，G3)及葡萄糖残基减少的对-硝基苯寡糖苷（4NP-G2，4NP-G3，4NP-G4）。4NP-G2、4NP-G3及部分4NP-G4，在α-葡萄糖苷酶催化下，进一步水解为葡萄糖和对-硝基酚（其摩尔数仅为酶解底物-4NP-G7的1/3，其余2/3还结合在4NP-G4中）。对-硝基酚的生成量在一定范围内与α-淀粉酶活性成正比 连续监测法 实验原理 EMBED Equation.3 \* MERGEFORMAT 碘－淀粉比色法 血清80～180U/dl 尿液100～1200U/dl 连续监测法 血清淀粉酶参考值上限：37℃，220U/L 尿液淀粉酶参考值上限：37℃，1200U/L 淀粉酶测定 参考区间 血清AMY测定主要用于诊断急性胰腺炎及急腹症的鉴别诊断 急性胰腺炎发病后8～12小时血清AMY开始增高，12～24小时达高峰，2～5天下降至正常。如达350U/dl时应怀疑此病，超过500U/dl有诊断意义。急性阑尾炎、肠梗阻、胰腺癌、胆石症、溃疡病穿孔及吗啡注射后等均可见血清AMY增高，但常低于500U/dl 尿AMY约于急性胰腺炎发病后12～24小时开始升高，下降也比血清AMY慢，在急性胰腺炎后期测定尿AMY更有价值 由于正常人血清中AMY主要由肝脏产生，故血清与尿AMY同时减低主要见于肝炎、肝硬化、肝癌及急性和慢性胆囊炎、急性酒精中毒等 淀粉酶测定 临床意义 脂肪酶（lipase，LPS）又称甘油三酯酶，是胰腺外分泌酶，通常只有小部分进入血循环。血清中的脂肪酶主要来自胰腺，少量来自胃肠黏膜 脂肪酶作用于底物和水的交界面，故仅当底物在乳化状态时脂肪酶才能发挥作用。现多用去氧胆酸钠作乳化剂配制底物 脂肪酶的测定方法主要有滴定法、分光光度法、比浊法和免疫法 血清脂肪酶活性测定 甘油三酯与水制成的乳胶，因其胶束对入射光的吸收及散射而具有乳浊性状。胶束中的甘油三酯在脂肪酶的作用下水解，使胶束分裂，其浊度或光散射因而减低。减低的速率与脂肪酶活力有关 实验原理 比浊法 波长546nm，比色杯光径1.0cm，进行比色测定，计算脂肪酶的活性单位。 *TOOS：N-乙酰-N-磺酸丙基苯胺 酶偶联法 实验原理 胰腺是人体LPS最主要来源。急性胰腺炎血清LPS升高，其升高的时间较AMY迟，但持续时间长，可达10～15天，有助于发病后期的诊断。约有40%～50%胰腺癌患者血清LPS升高，慢性胰腺炎时LPS也可升高。腮腺炎未累及胰腺时，LPS通常在正常范围。此外，总胆管结石或癌、肠梗阻、十二指肠穿孔等有时亦可增高 血清脂肪酶测定 临床意义 胰腺疾病的实验室检查近年来虽有很大进展，各种试验可以对急性胰腺炎、慢性胰腺炎及其他胰腺疾病的诊断，吸收不良原因的鉴别等提供帮助，但都有局限性。胰腺酶和胰腺外分泌功能的试验仍占有较重要地位 第三节　胰腺疾病实验的评价 血清淀粉酶、尿淀粉酶、淀粉酶同工酶测定 血清淀粉酶升高最多见于急性胰腺炎，其升高的程度越大，患急性胰腺炎的可能性也越大，因此尽管特异性和灵敏度都还不够高，目前还是用淀粉酶作为急性胰腺炎诊断的首选指标 急性胰腺炎时肾清除淀粉酶