2017年主管检验技师考试微生物检验讲义第15章弧菌科及检验.docVIP

第 PAGE \* MERGEFORMAT 1 页 共 NUMPAGES \* MERGEFORMAT 3 页 · 弧菌科及检验 　　弧菌科共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖的革兰阴性直或微弯的杆菌。　　弧菌科包括4个菌属，即弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属。前三属细菌均可引起人类感染，发光杆菌属对人无致病性。弧菌属极端鞭毛、甘露醇、脂酶、生长需要NaCl、对O129敏感五项为＋＋＋＋＋，气单胞菌属为－＋＋－－，邻单胞菌属为－－－－＋，发光杆菌属为－－＋/－＋＋。　　　　一、弧菌属　　弧菌属的细菌分布广泛，以水中最多。世界卫生组织腹泻病控制中心根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型O1群霍乱弧菌；③非O1群霍乱弧菌；④其他弧菌。最后一类包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌。本属菌共有100余种，大多数菌种为非病原菌，对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。 　　（一）霍乱弧菌　　霍乱弧菌是霍乱的病原菌，该病为一种急性烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。　　1.生物学特性　　（1）形态染色：本菌呈弧形或逗点状，大小为（1.4～2.6）μm×（0.5～0.8）μm。新分离的菌株形态典型，经人工培养后易失去弧形而呈杆状。无芽胞有菌毛，有些菌株有荚膜。一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼。取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动。液体培养物滴片染色镜检，可见排列如“鱼群状”革兰阴性弧菌。 　　（2）培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，耐碱不耐酸。常选用pH8.5的碱性蛋白胨水增菌培养，以抑制其他细菌生长，有利于本菌的繁殖，可在无盐环境生长。在碱性蛋白胨水中，经37℃培养6～9h，在液体表面大量繁殖形成菌膜，可达快速增菌的目的。　　在碱性琼脂平板上，经培养18～24h，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。在硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）上，形成较大黄色菌落。在含亚碲酸钾琼脂平板上，因还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。或庆大霉素琼脂上形成的菌落中心呈灰褐色。 　　（3）生化反应：两个生物型的霍乱弧菌均能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，产酸不产气。迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。氧化酶、明胶酶试验和ONPG试验均阳性。能产生靛基质，霍乱红反应（即亚硝基靛基质试验）阳性。　　（4）抗原结构与分型：霍乱弧菌具有耐热的特异性O抗原和不耐热的非特异性H抗原。H抗原为弧菌属所共有，特异性低。O抗原特异性高，具有群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。再根据是否与O1群抗血清凝集分成O1群霍乱弧菌和非O1群霍乱弧菌。O1群霍乱弧菌的菌体抗原由A、B、C三个抗原组成，O1群霍乱弧菌可根据其菌体抗原不同，又分三个血清型，即O抗原成分为AC的稻叶型，AB的小川型，ABC的彦岛型。 　　非O1血清群的O2～O138群广泛分布于地面水中，可引起散发的胃肠炎，从未引起过霍乱流行。因这些血清群均不与O1群抗血清凝集，又统称为不凝集弧菌。而1992年发现的新流行菌株为一种新群，即O139群。它不被O1群抗血清所凝集，亦不被O2～O138群抗血清凝集。能被O1群血清凝集，但不产生致病毒素的不致病弧菌称不典型O1群霍乱弧菌。　　生物型，O1群霍乱弧菌有两个生物型：古典生物型和EITor生物型。可通过下表加以鉴别。 　　如表：霍乱弧菌两个生物型的鉴别　　　　（5）变异性：有形态变异、菌落变异、溶血性变异和毒力变异。　　（6）抵抗力：本属菌对热、干燥、日光、酸、消毒剂很敏感。但耐碱力较强。 　　2.微生物检验　　（1）标本采集：标本以粪便为主，尽可能在患者用药之前采取。可用无菌棉拭子采取自然排出的新鲜粪便，亦可用直肠拭子由肛门插入直肠3～5cm处采集。一般米泔水样便采取1～3ml，成形便采取蚕豆大小。　　采集的标本应及时接种适宜培养基。不能及时接种者，要接种于保存或运送培养基内尽快送检。常用的保存或运送培养基有碱性蛋白胨水、文-腊二氏保存液和卡-布运送培养基等。 　　（2）检验方法及鉴定　　1）直接镜检：①动力观察：取患者米泔水样粪便制成悬滴片，观察细菌动力，可见流星或穿梭状运动的细菌；②制动试验：若患者米泔水样便标本或6h胨水增菌液中发现运动活泼的弧菌，可再做一张涂片，加一滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清（效价1:64），弧菌凝集，运动停止，则可鉴定；③涂片染色：取标本涂片2张，干燥后用乙醇固定，分别用革兰染色及1:10稀释复红染色，镜检观察有无革兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌。 　　2）分离培养：①直接