中枢神经系统疾病的基因治疗.pptVIP

中枢神经系统疾病的基因治疗 石奕武 神经科学研究所 广州医学院第二附属医院 概 述 研究概况 1990年，美国批准了人类第一个对遗传病进行体细胞基因治疗的方案， 即将腺苷脱氨酶（ADA）导入一个4岁患有严重复合免疫缺陷综合征 （SCID）的女孩。采用的是反转录病毒介导的间接法，即用含有正常人 腺苷脱氨酶基因的反转录病毒载体培养患儿的白细胞，并用白细胞介素 Ⅱ（IL－2）刺激其增殖，经10天左右再经静脉输入患儿。大约1－2月 治疗一次，8个月后，患儿体内ADA水平达到正常值的25％，未见明显副 作用。此后又进行第2例治疗获得类似的效果。致使世界各国都掀起了 基因治疗的研究热潮。 经过十几年的发展，基因治疗已取得初步的临床疗效，例如2000年 法国巴黎内克尔儿童医院利用基因治疗使11名有免疫缺陷的婴儿恢 复了正常的免疫功能,尽管后来有一名儿童患了白血病,但这仍是近 十年来基因治疗取得的最大成功。目前每年用于基因治疗上的总投资 在10亿美元左右，主要集中在美国，其次是欧洲。到2001年底全世界 已批准了600个基因治疗临床试验方案，其中针对癌症治疗的方案居首 位，有378个方案，占总数的63.1%；其次是针对单基因疾病、心血管 病、传染性疾病（主要是HIV）、基因标记和其他疾病治疗方案。 神经系统疾病的防治--人们面临的巨大挑战 大多数炎症、营养缺乏性疾病及良性肿瘤等， 通过传统的药物、手术和饮食疗法可以治愈 相当多的疾患不能治愈--帕金森病、亨廷顿病 等 有一些疾病至今仍无防治方法，如阿尔茨海默 病及恶性肿瘤等 全新的治疗概念──中枢神经系统(CNS)的基因 治疗(gene therapy) 一、中枢神经系统基因治疗概述 存在着一定的困难: ①CNS被严密的骨质系统所包裹,使得一些重要的 物理操作相对难以进行； ②完整的血脑屏障(BBB)的存在是向脑内导入基 因转移载体的天然屏障； ③神经系统功能的分子机制及其疾病的分子遗传学变 化最近才缓慢地得到了初步的认识,因此,能够通过基 因修饰而得到治疗的神经系统疾病较少; ④对于某些CNS代谢性疾病(如溶酶体蓄积病),在出生 之前就已经在细胞内有大量毒性物质的堆积,提示必 需在胚胎期就进行治疗才有可能取得满意的疗效; ⑤神经系统由多种功能不同并且高度分化的细胞组 成,细胞之间存在着不同的、复杂的甚至是变化着的 联系,不同的神经元和胶质细胞之间在结构上和功能 上可能存在着相当大的差异,因此,神经系统远比其 它器官都要复杂; ⑥神经细胞或胶质细胞均很难大量分离以用于原 代培养和遗传修饰。对成熟神经元和/或胶质细 胞进行遗传修饰并有效地进行脑内移植的技术方 法还未完全成熟。 随着近年来基因治疗的技术方法上的进展, 初步 结果显示基因治疗在CNS疾病的治疗中也具有广 阔的应用前景。其原因在于: ①随着定位克隆和疾病相关基因的分离和鉴定技 术的发展,越来越多的神经系统疾病的遗传学病 因得到了澄清; ②随着对疾病发生发展的分子机制了解的 深入,目前已经确认的基因治疗方法不仅适 用于有明确基因改变的遗传性疾病,而且也 适用于非遗传性疾病的治疗; ③ 可以使用非神经细胞或非胶质细胞(如自 体成纤维细胞或成肌细胞)作为遗传修饰细 胞; ④ 最近发现有些药物可造成BBB的一过 性渗透性损伤,从而使大分子物质甚至基因 转移载体进入脑内; ⑤已成功地构建了一些新型的、能够感染非 分裂期终分化细胞(如神经元)的病毒基因转 移载体(如复制缺陷型重组腺病毒、疱疹病毒 及腺病毒相关病毒等),从而使向成熟神经元 和/或胶质细胞内直接进行基因转移成为可 能。 （一）中枢神经系统基因治疗的分类 根据靶细胞分类 生殖细胞(germ cell)基因治疗:将受精卵或早期 胚胎细胞做为治疗目标进行生殖细胞的基因治疗 是可行的；受精卵或早期胚胎细胞的遗传改变势 必影响后代，伦理学障碍和技术上的困难使生殖 细胞基因治疗目前仍为禁区。 体细胞(somatic cell)基因治疗：体细胞基因治疗 只涉及体细胞的遗传转变，不影响下一代，现已被 广泛接受做为CNS严重疾病的治疗方法之一，在现代 伦理道德上是可行的。方法上易于施行，而且已取 得了可喜的成果。 指外源基因克隆至一个合适的载体，首先导入体外 培养的自体或异体(有特定条件)的细胞，经筛选后 将能表达外源基因的受体细胞重新输回受试者CNS内, 实质上就是遗传修饰细胞的脑移植。 经典、安全、而且效果较易控制，但是步骤多、技 术复杂、难度大、不容易推广。 2、基因修正(gene correction) 将致病基因的突变 碱基序列纠正，而正常部分予以保留。 如基因打靶技术(同源基因重组)的研究进展已表明， 哺乳动物细胞基因组确实存在