第一节PCR扩获得目的基因或cDNA第二节基因组文库的.pptVIP

第一节　PCR扩增获得目的基因或cDNA 第二节　基因组文库的构建与基因分离 第三节　cDNA文库的构建与筛选 第四节　根据差异表达获得目的基因 第五节　基因的化学合成 第五章 目的基因的获得 基因克隆的本质是把某一目的DNA片段通过无性方式进行扩增和表达，而这一过程往往是通过载体和寄主细胞来实现的。 一般而言，基因克隆包括四部分工作： 1、目标DNA片段的获得； 2、克隆载体的构建； 3、寄主细胞的转化； 4、重组体克隆的选择和鉴定。 目前，以大肠杆菌为寄主，以质粒和噬菌体等为载体的基因克隆体系已经相当的成熟。 大肠杆菌作为寄主进行DNA克隆的实验方案 DNA片段 的获得 载体构建 细菌转化 重组体 的鉴定 限制性内 切酶消化 机械切割 双链cDNA 的合成 化学法 直接合成 同聚物 加尾 粘性末端 连接 平末端 连接 加接头造成 粘性末端 重组噬菌体 DNA转染 重组质粒 的转化 体外包装 进行转导 表型鉴定 核酸杂交 免疫学分析 酶切鉴定 　PCR法定向扩增目的基因的基本原理 　　　PCR（Polymerase Chain Reaction）法，又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术，是一种高效快速的体外DNA聚合程序 　　　使用PCR法克隆目的基因的前提条件是：已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列，根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物。