乙型肝炎病毒基因分型与TaqMan-MGB荧光探针方法改进.docVIP

PAGE PAGE 1 乙型肝炎病毒基因分型与TaqMan-MGB荧光探针方法改进 郑卫东1， 胡菊2? （1.湖北医药学院附属人民医院检验部，湖北十堰442000 2.十堰职业技术学院生化和环境工程系，湖北十堰 442000） [摘要] 目的 改进对乙型肝炎病毒(HBV) S基因TaqMan-MGB型特异性荧光探针设计，使探针序列与非本型靶基因核苷酸靶序列，有2-4碱基不互补，以此提高TaqMan-MGB型荧光探针特异性，建立一种快速准确的实时PCR检测乙型肝炎病毒基因型方法。方法 根据HBV基因型A～H的全序列 ,在S基因区设计引物和型特异性TaqMan-MGB探针,建立实时PCR检测HBV基因型方法，并检测88例CHB患者的 HBV基因型，同时对扩增的PCR产物,进行核苷酸序列测定,应用统计学方法对两者进行比对。结果 CHB血清样本中HBV以基因型B和C为主、基因型A、B、C、B+C、D样本比例分别为2.3%、45.5%、35.2%、12.5%、2.3%，未检测出其它基因型，S基因测序结果与本分型法完全一致。结论　应用改进TaqMan-MGB探针建立的实时荧光PCR HBV基因分型法和目前PCR扩增后测序、限制性内切酶酶切后电泳或核酸杂交相比，更能简便、灵敏、快速、准确地鉴定 HBV基因型。 [关键词] 肝炎病毒；基因型；聚合酶链反应；TaqMan-MGB探针 HB