放线菌和霉菌的形态观察.docxVIP

实验4 放线菌和霉菌的形态观察 实验时间：20 18年 4月 18 日 星期 三 第 789 节 实验地点：13- 133 姓名：张金中 学号：16110701056 班级：生工1602 组别 指导老师 报告成绩 同组成员姓名：刘松良、张岩 11 高秀珍 1. 实验目的 学习并掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征 学习并掌握观察四类常见霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征 2. 实验原理 放线菌原理 放线菌是由不同长短、纤细的菌丝所形成的单细胞的菌丝体。菌丝体分为两部分，即 潜入培养基中的营养菌丝(或称基内菌丝，简称基丝)和生长在培养基以上的气生菌丝。有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等，孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。能否产生气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为放线菌分类鉴定的重要依据。 放线菌的菌落形态特征为: 形成干燥、不透明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。菌落与培养基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。 霉菌原理 霉菌是一类可产生菌丝体的真核微生物的统称。霉菌的菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。霉菌的菌丝体分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。霉菌菌丝较粗大，细胞容易收缩变形，而且孢子很容易飞散、所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片特点是: (a) 细胞不变形: (b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间; (c) 溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据。 3. 材料仪器 1、菌种: 放线菌划线平板28C,3-5 天后培养物;产黄青霉，黑曲霉，黑根霉，等斜面或平板划线菌种28C培养2~3 天。 2、染料和试剂: 0.1%乳酸石炭酸棉蓝染色液，石炭酸复红染色液，吕氏碱性美蓝染液，无菌水等。 3、器材: 显微镜，载玻片，镊子，接种环，玻璃刮，玻璃纸，细口滴管，剪刀，培养皿，圆形滤纸片等。 4. 方法步骤 (一) 放线菌形态观察 1、水封片观察 (1)取一套高氏1号平板，将菌种划线方法接种，把灭菌过的盖玻片斜插在培养基中，一半露出，在28C下培养5~7d 备用。 (2) 取一滴棉蓝染色液置于载玻片中央，将上述长有菌丝的盖玻片取出，把一面的培养基擦净。然后把长菌丝一面朝下，盖住染色液，制成水封片，用高倍镜观察其气生丝、孢子丝和孢子。 2、玻璃纸法观察 (1)取一套高氏1号平板，将一张适中的玻璃纸平铺在平板上，用无菌玻璃刮展平，然后用接种环取一环斜面种在玻璃纸上划线接种，或用玻璃刮涂布接种，倒置放入28C下培养5~7d,此时可见到玻璃纸表面长出菌丝和孢子的颜色便可取材观察。 (2)取一块干净的载玻片，滴加一滴水，用剪刀从长菌的玻璃纸边缘处剪下一小块，上下方向不变，移至载玻片的水滴上以其底部接触水面。使其展平，不要有气泡，不要加盖玻片便可直接在显微镜下观察。先用低倍镜观察菌丝的立体生长状况，再用高倍镜仔细观察。注意区分放线菌的基内菌丝、气生菌丝和弯曲状或螺旋状的孢子丝。 3、影印法观察 用涂布法或划线法培养出单个菌落，然后用小刀小心地刮一个菌落，翻过压印在载玻片中央，小心地移开菌落，载玻片中央就留下菌落印痕。在火焰下固定，滴一滴石炭酸复红染色, 水洗后晾干，在高倍镜或油镜下观察。 (二) 霉菌形态观察 霉菌的载玻片湿室培养 (1)湿室用具准备 在培养皿底铺一张圆形滤纸片，载玻片和盖玻片和玻棒，外用纸包扎，经121C湿热灭菌30min后，置60C烘箱烘干，备用。 (2) 接种 在超净工作台内，将两条玻棒放入平皿内适当位置，放上载玻片，然后用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子至湿室内的载玻片上，每张载玻片可接同一菌种的孢子两处。接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可(务必记住接种的位置)。 (3) 加培养基 用无菌细口滴管吸取少量融化约50度的培养基，滴加到载玻片的接种处，培养基应滴得圆而薄，其直径约为0.5cm (滴加量一般以1/2 小滴为宜)。 (4) 加盖玻片 在培养基未彻底凝固前，用无菌镊子将无菌盖玻片盖在琼脂块薄层上，用镊子轻压，使盖玻片和载玻片之间的距离相当接近，但不能压扁，否则不透气， (5