环氧活化偶联介质Epoxy.doc

中科森辉微球技术(苏州)有限公司 苏州工业园区金鸡湖大道99号纳米城NW-02幢 #713 邮编：215123 PAGE2 / NUMPAGES2 环氧活化偶联介质（Epoxy-activated QZT 6FF）产品说明书 1. 产品简介 Epoxy活化偶联介质可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联，广泛十分广泛。Epoxy-activated QZT 6FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，采用环氧活化的方法活化琼脂糖上的羟基，活化后即可直接用于各种配基的偶联。Epoxy-activated QZT 6FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广（偶联氨基、巯基和羟基）的特点。 2. 产品特性 环氧活化偶联介质的理化性质和产品特性如表1所示。 表1 环氧活化偶联介质的理化性质和产品特性 参数 指标 基质* 6%交联琼脂糖凝胶 活化基团 环氧基 形状 球形 介质平均粒径 90 μm (45-165) 活化基团密度 20-40 μmol/ml wet gel 偶联条件 pH 9-13，温度20-40 oC，时间5-24 h， 可以在水相或者有机相中偶联 最高流速（25℃ 600 cm/h 推荐流速 150 cm 最高耐压 0.3 MPa (3 bar) 保存 -20 oC（异丙醇） *：除6FF基质外，也可以提供4B、4FF和6B基质的环氧活化介质。 3. 应用 Epoxy活化偶联介质广泛用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联。具体的操作步骤如下（以10 ml活化胶偶联BSA为例）： 清洗：用10-20倍胶体积的去离子水冲洗（大于5次）保存于异丙醇的环氧活化胶，除去异丙醇，抽干，将10 ml（约7.5 g）加入到30 ml的反应器（磨口三角瓶）中，备用。 偶联：称取100 mg BSA，溶解于15 ml 0.1 M碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（pH 10.5），加入到抽干的活化胶中，在摇床上振荡，37℃偶联12-24 h；反应完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，收集料液用于未偶联 BSA的分析和偶联配基密度的计算，偶联配基的微球水洗后抽干。其他配基的偶联方法与BSA类似，但反应条件（pH、温度、时间、配基加入量）需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。若配基含有游离巯基，可选用0.1 M硼砂-硼酸缓冲液，pH 8.6，通过巯基进行偶联。 （偶联注意事项：偶联氨基可选用pH 9-13的缓冲液，偶联巯基可选用pH 8.6的缓冲液；避免使用可以和环氧基反应的含氨基的缓冲液，可选用磷酸盐、碳酸盐、硼酸盐和氢氧化钠溶液；pH越高、温度越高，偶联速度越高；时间越长，偶联反应越彻底，但偶联条件的选择还要兼顾配基的稳定性。） 封闭：将10 ml抽干的偶联BSA的胶加入到100 ml三角瓶中，加入30 ml 1 mol/L乙醇胺，pH 10.5溶液（或0.1 mol/LTris-HCl，pH 10.5）。反应温度恒定在37 ℃，搅拌速度120 rpm，反应时间4 h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。 清洗：偶联BSA的介质依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤（重复交替清洗3次），抽干，去除未反应的配基。 保存：保存于4℃ 4 特色服务 （1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。 （2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。 （3）按客户要求提供各种规格的预装柱。 （4）为客户提供专业的售前和售后服务。