第七章思考题.DOC

第七章思考题 何为限制性内切酶？它有什么作用和特点？ 答：限制性内切酶是（restriction endonuclease）：一类能识别双链DNA分子中特定核柑酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。 目前已鉴定出3种不同的限制性内切酶，分别是Ⅰ型酶、Ⅱ型酶、Ⅲ型酶。Ⅰ型限制性内切酶是能够识别特定的DNA核苷酸序列，并与之结合，但切割点是随机的，没有专一性，也就是说，不能专门切割DNA的某种特殊位点，因此，这类酶在基因工程中用处不大。Ⅱ型限制性内切酶能够识别特定的DNA核苷酸序列，并能在特殊位点切割DNA，产生粘性末端或其他形式的DNA片段，因此，这种酶是基因工程的常用酶。Ⅲ型限制性内切酶有独特的识别方式和切割办法，如MboⅡ，它有特定的识别位点，但切割是从识别位点的一侧开始测量一定的距离后切割，使得切割处的碱基随机化。所以这种酶也不能用于基因工程。 如何进行DNA顺序分析？其步骤如何？ 答： eq \o\ac(○,1)、待测模板 准备DNA模板，然后计算代测模板用量，最后质粒模板变形（96℃，2分钟，冷却至室温加入其他的成分，PCR产物不需变性。 eq \o\ac(○,2)反应终止及产物纯化 加入反应终止液2.5μl（组成为：NaAc 3M,EDTA 0.1M,Glycogen 20mg/ml）。 95%冰乙醇沉淀并离心，70%冰乙醇洗涤并离心。 真空抽干沉淀，加