GB/T 36822-2018瓜类果斑病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020 .0 1 B 16 国； 中华人民共和国国家标准 GB/T 36822-2018 瓜类果斑病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of A cidovorax citrulli 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. 'I (J GB/T 36822-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准向全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271 ）提归井归I Io 本标准起草单位：中同检验检疫科学研究院、深圳市检验检疫科学研究院、南京农业大学、中华人民 共和同新疆出入境检验检疫局、中同农业科学院植物保护研究所、同家瓜类t程技术研究中心、江苏省 植物保护植物检疫站。 本标准主要起草人：赵文军、冯建军、田茜、田艳丽、张祥林、赵廷同、胡内石、龚伟荣。 I GB/ T 36822-2018 附录 B （ 规范性附录） PCR 凝胶电泳检测 B.1 51 物序列 BX- Ll/ BX- S-R 2 : BX- Ll : 5'-CAGCT GGGAGCGAT CTTCA T - 3' ; BX- S-R 2 :5 1-GCGT CAGGAGGGT GAGT AGCA-3 ＇ 。 SEQID4/ SEQID5 : SEQID4 , 5 1-GTCA TTACTGAATTTCAACA- 3' ; SE QID5 , 5’- CCTCCACCAACCAAT ACGCT-3 ’ 。 B.2 PCR 反应体系 25 p.L 反应体系，PCR Premix 12.5 /.t L , H 20 9.5 µL, DNA 模极 1 p.L, 20 p.mol/L 引物各 1 µLo B.3 PCR 反应程序 BX- Ll/ BX- S-R 2 : 94 ℃／5 min; 94 ℃／30 s ,68. 1 ℃／30 s, 72 ℃ 30 s, 35 个循环；72 ℃／8 min; 4 ℃保存。 SEQID4/SE QID5 : 95 ℃／5 min; 9 5 ℃／30 日， 53 ℃／30 s , 72 ℃／30 s, 35 个循环；72 ℃／5 mi n; 4 ℃保存。 不同仪器可根据仪器要求将反应参数作适当调整。 B.4 琼脂糖凝胶电泳 PCR 产物用 1.5 %琼脂糖凝胶进行电泳，凝胶成像系统观察、拍照。 BX-Ll/ BX- S-R2 引物对扩增 片段大小为 2 79 bp o SEQID4/SEQID5 引物对扩增片段大小为 246 bp o B.5 结果判定 阳’性对照在预期大小位置产生明显条带，阴性对照及空向对照在预期大小位置未