GB/T 36820-2018甘蔗条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36820-2018 甘震条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶 链式反应（RT-PCR）检测方法 Detection method of Sugαrcane streαk mosαic virus by real-time reverse transcription polymerase chain reaction ( RT-PCR ) 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. ' I (J GB/ T 36820-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出井归口。 本标准起草单位： 福建农林大学同家甘煎t程技术研究中心、农业部甘服及制品质量监督检验测试 中心、农业部福建廿班生物学与遗传育种重点实验室。 本标准主要起草人： 高三基、黄美婷、傅华英、孙生f：、张慧丽、王锦达、陈如凯。 I GB/T 36820-20 18 甘蕉条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶 链式反应（ RT-PCR） 检测方法 1 范围 本标准规定了甘煎条纹花叶病毒（Sugaγα1 11P 写lreah mοsC1it virus ） 实时荧光反转录聚合陪链式反 应（RT-PCR）检测方法的仪器与设备、试剂与材料、样品的采集与前处理、检测以及结果判断与表述等。 本标准适用于可能带有it煎条纹花叶病毒的吊体寄主植物的快速检测、诊断。 2 缩略i吾 下列缩略语适用于本文件。 CP ：外壳蛋白（coat protein) Ct 值：实时荧光 PCR 反应中，每个反应管内的荧光信号达到设定的阔值时所经历的循环数（cycle threshold) cDNA ： 与 RNA链互补的单链DNA(compl ementary DNA) Ex T aq HS 酶： 热启动 DNA 聚合鸭山ot start DNA polym erase) FAM,6－援基荧光素（6- carboxy- flu orc scein) PCR： 聚合酶链式反应（polymerase ch ain r eaction) RNA ：核糖核酸（rihon ucleic acid) RT-PCR： 反转录聚合隅链式反应（reverse transcription polym巳rase chain reaction ) SCSMV : Itl［条纹花叶病毒（ SuJ.;(ffC(/1/P st rpa企 mο川ic vir川） TAMRA, 6－援基匹i 甲基罗丹明（6- carb ox ytctramcthy Ir hodamine) Tip ：吸头 3 方法原理 根据甘煎条纹花叶病毒 CP 基因序列设计一对仅在该病毒 CP 基因间保守的特异性引物和一条特 异性的荧光双标记水解型寡核背酸探钊（TaqMan 探告｜）。 首先利用反转录隅将病毒 RNA 反转成 cDNA，再以 cDNA 为模板在同