检验仪器汇总说明.pptVIP

一、免疫浊度法 基本原理 免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。 二、免疫浊度法分类 （一）透射光免疫浊度法 透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。 （二）散射比浊法 散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（3*10）呈全透射，透射与散射相当。当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90°以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。 1、终点散射比浊法 终点法是将抗原抗体混合后，待其反应趋于平稳、直到反应终末时测定结果。 2、速率散射比浊法 所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。 （三）粒子强化免疫浊度测定法 粒子强化免疫浊度测定法的基本原理是，选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗体后，当遇到相应抗原时，则发生聚集，单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个胶乳颗粒凝聚时，则使透射光减少，这种减少的程度与胶乳凝集成正比，当然也与抗原量成正比。 固相酶免疫测定技术 酶是一种能催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有的人造催化剂，一般可使反应加速108～1010倍. 酶具有高度的专一性，即每一种酶只催化一种或一组密切相关的化学反应. 一、固相酶免疫测定的原理和类型 EIA是将酶催化的放大作用与抗原、抗体的免疫反应相结合的一种微量分析技术。酶标记抗体或抗原后，既不影响抗体或抗原的免疫反应特异性；也不改变酶本身的催化活性，即在相应的反应底物参与下，标记的酶可以使底物基质水解而呈色、或使供氢体由无色的还原型转变为有色的氧化型。 呈色反应显示了反应体系中酶、也就是被标记的抗体(或抗原)的存在，从而证明发生了相应的免疫学反应。 （二）ELISA反应的类型： 1、双抗体夹心法 检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： （1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合抗体及杂质。 （2）加受检标本，与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。 （3）加酶标抗体。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时，固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。 （4）加底物显色。夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 2、间接法测抗体 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下： (1) 将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。 (2) 加稀释的受检血清。血清中的特异性抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物，经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。 (3) 加酶标抗免疫球蛋白（酶标抗抗体，一般为酶标抗人IgG )。它与固相复合物中的抗体相结合，从而使该抗体间接地标记上酶。清洗后，固相载体上的酶量与特异性抗体的量相关。 (4) 加底物显色。颜色深度与标本中受检抗体量相关。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。本法的主要缺点为受检标本须经稀释（1:50-1:20）的后才能进行测定，否则血清中高浓度的非特异性IgG和其他干扰物质会引起阴性本底过高，影响结果的判断。 3、双抗原夹心法 反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。同属抗体检测，与间接法不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。在间接法不适用时（例如包被抗原中的杂质可与酶标记的抗入IgG反应），可试用此法。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。在临床检验中，抗HBs的ELISA常采用本法。 4、竞争法测抗体 当相应抗原材料中含有与抗入IgG反应的物质，而且不易得到足够的纯化抗原进行包被