抗体纯化以和蛋白浓度测定程序.PDFVIP

抗体纯化以及蛋白浓度测定程序 操作程序 实验试剂及仪器 试剂：Sulfolink couping gel （THERMO ）、层析柱、氯化钠、1*PBS 、1M Tris、100mM 甘 氨酸（pH2.2 ）、EDTA(pH 8.5)、甘油 仪器：恒流泵、旋转培养器 流程：（一）亲和层析柱的制备 原理：活化的琼脂糖凝胶通过偶联抗原蛋白的巯基，从而使抗原结合在固相载体上 试剂：偶联 Buffer (50mM tris、5Mm EDTA-NA)PH 8.5 Wash buffer(1*PBS 320mM 氯化钠) 1) 称取 8-10mg 多肽，用 2ml 偶联 Buffer 溶解，蛋白则根据蛋白 浓度取合适体积，总含量在 10mg 左右。 2) 取 2ml Sulfolink couping gel 于层析柱中，将抗原加入层析柱于旋转培养器上旋转 2-3 小时 （二）抗血清纯化 1) 将层析柱静置在层析架上 30 分钟，连接恒流泵。 1 2) 平衡 40ml 1*PBS 流速 2.0、30ml 1*Gly、30ml 1*PBS 将柱子内环境平衡到中性 3) 上样 样品中加入 1/20 4