小鼠α骨胶原交联αCTxELISA检测试剂盒.pdf

本试剂盒只能用于科学研究 ，不得用于医学诊断。 小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒使用 说明书 【小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒 试剂盒名称】 小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒 【小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒 试剂盒用途】 定量小鼠血清、血浆及相关液体样本中α骨胶原交联(αCTx)的含量 【小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法 （ELISA ）。将标准品、待测 样本加入到预先包被α骨胶原交联(αCTx)透明酶标包被板中 ，温育足够时间后 ， 洗涤除去未结合的成分 ，再加入酶标工作液 ，温育足够时间后 ，洗涤除去未结合 的成分。依次加入底物 A、B ，底物 （TMB ）在辣根过氧化物酶 （HRP ）催化下 转化为蓝色产物 ，在酸的作用下变成黄色 ，颜色的深浅与样品中α骨胶原交联(α CTx)浓度呈正相关 ，450nm波长下测定 OD值 ，根据标准品和样品的 OD值 ， 计算样本中α骨胶原交联(αCTx)含量。 【小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒 试剂盒组成】 1 酶标包被板 12孔×8条 7 底物夜 A 6mL 2 标 准 品 ： 0.6mL 8 底物夜 B 6mL 200ng/ml 3 20 倍浓缩洗涤 20mL 9 终止液 6mL 液 4 标准品稀释液 6mL 10 说明书 1份 5 样本稀释液 6mL 11 封板膜 1张 6 酶标试剂 6mL 12 密封袋 1个 备注 ：标准品用标准品稀释液依次稀释为 ：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml 【小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、 标准规格酶标仪 3、 精密移液器及一次性吸头 4、 蒸馏水 5、 一次性试管 6、 吸水纸 【小鼠α骨胶原交联(αCTx)ELISA 检测试剂盒操作步骤】 1、准备 ：从冰箱取出试剂盒 ，室温复温平衡 30分钟。 2、配液 ：用蒸馏水将 20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本 ：取足够数量的酶标包被板 ，固定于框架上 ，分别设 置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔 ，记录各孔位置 ，在标准品孔中加入标准 品 50μL ；待测样本孔中先加入待测样本 10μL ，再加样本稀释液 40μL （即样本 稀释 5倍 ）；空白对照孔不加。 4、温育 ：37℃水浴锅或恒温箱温育 30min。 5、洗板 ：弃去液体 ，吸水纸上拍干 ，每孔加满洗涤液 ，静置 1min ，甩去洗 涤液 ，吸水纸上拍干 ，如此重复洗板 4 次 （也可用洗板机按说明书操作洗板 ）。 6、加酶标工作液 ：每孔加入酶标工作液 50μL ，空白对照孔不加。 7、温育 ：重复 4 的操作。 8、洗板 ：重复 5的操作。 9、显色 ：每孔先加入显色剂 A 液 50μL ，再加入显色剂 B液 50μL ，37℃避 光显色 15min。 10、终止 ：取出酶标板 ，每孔加终止液 50μL ，终止反应 （颜色由蓝色立转黄 色 ）。 11、测定 ：以空白孔调零 ，在终止后 15分钟内 ，用 450nm波长测量各孔的 吸光值 （OD值 ）。 12、计算 ：根据标准品的浓度及对应的 OD值 ，计算出标准曲线的直线回归 方程 ，再根据样本的 OD值 ，在回归方程上计算出对应的样品浓度 ，也可以使用 各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀