基于细胞色素P450复合膜修饰电极的电化学生物传感研究分析化学专业论文.docxVIP

I I 摘 要 细胞色素 P450（Cytochrome P450，CYP）是存在于绝大部分生命体内、结 构类似的一族氧化还原蛋白酶的总称。P450 酶种类多样，可以催化多种类型的 反应，它不仅能对药物、杀虫剂、环境内分泌干扰物等外源性物质具有代谢作用， 还参与一些内源性物质如脂肪酸、甾类激素、前列腺素等的合成，在生物体中起 着十分重要的作用。基于细胞色素 P450 电化学和生物传感研究是近年来的研究 热点，因为该方法可以模拟生命体，探索 P450 的直接电化学及其催化机理，进 而了解其在生物体内的作用机制，而且有助于我们制备出高效的生物传感器和生 物医学器件。 本论文以实现细胞色素 P450 酶的直接电化学和电催化为目的，构建了几种 新型的复合材料作为细胞色素 P450 的固定材料。这些材料不仅为 P450 提供了有 利的微环境，同时为实现 P450 与电极间进行直接电子传递起了促进作用。包埋 在这些复合材料中的 P450 能实现其直接电化学，并对相应的底物表现出良好的 催化性能。本论文的工作主要有： 1. 利用表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）良好的分散性，将导电性材料乙 炔黑（AB）均匀地分散在 SDS 溶液中，得到一种稳定的复合材料 SDS-AB，用 于固定细胞色素 P450 6A1（CYP6A1）。研究结果表明，CYP6A1 被成功地固定 在 SDS-AB 复合材料中，该复合材料不仅为 CYP6A1 提供了仿生的微环境，同 时大大促进了 CYP6A1 与电极间的电子传递。SDS-AB/CYP6A1 修饰电极在 0.1 mol·L-1 的磷酸缓冲溶液(PBS)中有一对稳定的准可逆氧化还原峰。该修饰电极对 CYP6A1 的底物氧气和黄体酮表现出良好的催化作用。 2. PEG 因具有良好的生物相容性和抗污能力被广泛用于生物医疗器件、生物 传感器等方面。本文采用 PEG2000 作为生物传感器的固定材料，将细胞色素 P450 3A4（CYP3A4）固定在电极表面，PEG2000 能够为蛋白质提供一个安全、稳定的 微环境，AB 作为一个电子传递促进剂被引入该体系中。研究表明，固定于该复 合体系中的 CYP3A4 能够实现其直接电化学，表现出良好的电化学行为。利用 此修饰电极检测环境内分泌干扰物莠去津，可以得到较灵敏的电化学响应。 3. 合成了一种新型的基于 2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱（MPC）和甲基 丙烯酸缩水甘油酯（GMA）的磷脂基聚合物 P(GMA-co-MPC)。乙炔黑能够均匀 地分散在该聚合物溶液中，形成一种稳定的悬浮液。CYP3A4 被成功地固定在该 复合膜内。研究结果表明，该聚合物能够牢牢地将蛋白质固定在膜内，为 CYP3A4 提供了一个仿生的微环境，同时 AB 作为一种导电性能良好的材料能够大大促进 II II 电子传递。固定在该复合膜内的 CYP3A4 表现出稳定、灵敏的电化学响应，实 现了酶与电极间的直接电子传递。将该修饰电极用于检测环境内分泌干扰物己烯 雌酚，检测线性范围为 2.0×10-7 -2.8×10-6 mol·L-1，检测限达 5.9×10-8 mol·L-1。 关键词：细胞色素 P450；直接电化学；电催化；生物传感器；环境内分泌干扰 物 PAGE VI PAGE VI Abstract Cytochrome P450 (CYP) is a family of redox proteins existed in most of the life. P450 enzymes possess excellent catalytic abilities, which are responsible for catalyzing various kinds of reaction. It is involved in metabolizing exogenous compounds, e.g. drugs, pesticides, environmental pollutants etc, and synthetizing of some endogenous substances such as fatty acids, steroid hormone, prostaglandins, etc. The electrochemistry of P450s attracted considerable attention recently because it can not only provide information of electrochemistry and electrocatalytic mechanism of P450s, but also is an effectiv