海水养殖源弧菌耐药性检测与整合子分析-临床兽医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 上海海洋大学 硕士学位论文答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 杨先乐 上海海洋大学 教授 主席 薛辉 江苏省淡水水产研究所 研究员 委员 李新仓 东海水产研究所 副研究员 委员 委员 委员 王元 东海水产研究所 实习研究员 秘书 答辩时间 2014 年 6 月 3 日 13：00 时 答辩地点 6 号楼 3 楼会议室 所研究生工作小组意见： 所研究生工作小组负责人（签字）： 年 月 日 注：答辩委员会至少由 3 人组成，填报 5 人，至少 2 人为硕导（所外填报 1 人）， 另设秘书 1 人，评阅人和答辩委员重复不超过 1 人。 上海海 上海海洋大学硕士学位论文 海水养殖源弧菌耐药性检测与整合子分析 摘 要 弧菌是一种革兰氏阴性菌，弧菌科弧菌属，弯曲成弧形，菌体短小，单端鞭 毛无芽孢的短杆状细菌，分布广泛，常见于海洋环境。它是一种条件致病菌，当 水质状况和宿主体质状况发生改变时，易引起大范围弧菌病的爆发。此外，副溶 血弧菌、创伤弧菌和美人鱼弧菌等是人畜共患病原菌。因此，为了明确海水养殖 源弧菌在不同省份和不同动物中的存在情况、结构组成，本文通过弧菌特异性培 养基 TCBS 的筛选、生化鉴定和 HSP60 基因的检测，在中国江苏、浙江、福建和 海南地区的发病动物和养殖池塘水最终分离得到 106 株弧菌，分别为：副溶血弧 菌 33 株，哈维弧菌 33 株，溶藻弧菌 15 株，鳗弧菌 9 株，创伤弧菌 4 株，Vibrio cyclitrophicus 3 株，霍乱弧菌 3 株，灿烂弧菌 2 株，查氏弧菌 2 株，拟态弧菌 1 株， 弗尼斯弧菌 1 株。 检测 106 株海水养殖源弧菌的耐药情况，可以反映当前水产养殖中抗菌药物 使用情况，并为今后的水产养殖生产用药提供一定的理论科学依据。本文首先通 过纸片扩散法测量 106 株弧菌对八类 14 种常见抗菌药物的抑菌圈直径，结果显示： 氨基糖苷类中的链霉素和卡那霉素是耐药最严重的药物，β-内酰胺类中的新生霉 素是耐药较为严重的药物；而诺氟沙星、氟苯尼考、氯霉素和头孢曲松四种药物 是敏感率较高的药物，分别为 97.17%、94.34%、93.40%、92.45%；对每株弧菌的 耐药谱型分析得知，对 3 种或 3 种以上抗菌药物耐药的多重耐药菌株有 42 株，占 总数的 39.62%，3 耐的抗菌谱型中 S/K/NV 最多，占 3 耐总数的 72.22%，12 个 4 耐抗菌谱型比较散乱，只有两株弧菌具有相同的耐药谱型即 S/NV/RD/K，占 16.67%， 6 个 5 耐抗菌谱型中 S/TE/SXT/RD/DO 出现 3 次，占 50%，1 个 7 耐抗菌谱型为 S/C/TE/NV/RD/DO/K ， 2 个 8 耐 抗 菌 谱 型 分 别 为 E/S/C/TE/SXT/NV/RD/K 和 CIP/CRO/S/TE/SXT/NV/RD/FFC。其次使用肉汤微量稀释法检测 106 株弧菌对 8 种抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC），结果显示：链霉素的平均 MIC 值最高，为 80.12 μg/ml，其余由大到小依次为红霉素 26.47μg/ml、氯霉素 8.16μg/ml、复方新 诺明 5.89/29.47μg/ml、头孢曲松 2.73μg/ml、诺氟沙星 0.94μg/ml、氟苯尼考 0.92μg/ml、 利福平 0.48μg/ml。最后在对上述两种方法进行相关性分析，结果发现：纸片扩散 法的抑菌圈直径和肉汤稀释法的 MIC 值呈负相关（个别药物的个别菌株除外），即 I 两种方法的检测结果是一致的。 本文使用普通 PCR 技术检测 106 株海水养殖源弧菌的整合子-基因盒携带情况。 首先，对所有分离株的 5保守端的一类、二类、三类整合酶基因和 3末端的基因进 行扩增，结果显示：一类整合酶的阳性率为 89.62%（95/106），二类整合酶的阳性 率为 0%（0/106），三类整合酶的阳性率也是 0%（0/106）；在对一类整合子的 3 末端扩增时得知，qacEΔ1 的阳性率为 10.38%（11/106），Sul1 基因的阳性率为 11.32% （12/106）。其次，本文研究了 106 株弧菌分离株对三氯异氰脲酸和和苯扎溴铵两 种消毒剂的最小抑菌浓度，结果显示：两种消毒剂的 MIC 值分别高达 498.00 mg/L 和 320 mg/L，这表明弧菌分离株对消毒剂也产生一定程度的耐药性。最后，本文 对一类整合子的 5保守端和 3末端都呈阳性的 8 株弧菌的可变区进行扩增，结果显 示：其中有 3 株弧菌共携带两种基因盒：一株溶藻弧菌 239 携带 arr-3-dffrA27 基 因盒，一株 Vibrio cyclitrophicus 295 携带