6,7,4’-三羟异黄酮靶向CDK1和CDK2阻止人类结肠癌细胞增殖.docVIP

6,7,4’-三羟异黄酮靶向CDK1和CDK2阻止人类结肠癌细胞增殖 结肠癌是一种普通的上皮恶性肿瘤。流行病学证据表明营养与规定的食物成分是参与这种疾病形成的重要环境因素。我们在人类结肠癌体内与体外模型研究了6,7,4-三羟异黄酮（黄豆苷元的一种代谢物）的生物活性。6,7,4-三羟异黄酮比黄豆苷元更加有效的抑制HCT-16和DLD1人类结肠癌细胞的贴壁依赖和非依赖性生长。此外，6,7,4-三羟异黄酮诱导HCT-116人类结肠癌细胞的细胞周期阻止于S和G2/M周期。蛋白质印迹分析表明6,7,4-三羟异黄酮有效地抑制了CDK2的表达，但是对其他S期或者G2/M期调控蛋白如周期蛋白A，周期蛋白B1和CDK1没有作用。黄豆苷元不影响这些蛋白任何一个的表达。在激酶和pull down试验中，6,7,4-三羟异黄酮直接与CDK1和CDK2相互作用来阻止HCT-116细胞中CDK1和CDK2的活性，但黄豆苷元不能够。在异种移植的小鼠模型中，6,7,4-三羟异黄酮显著地减少了HCT-116异种移植的肿瘤生长、体积和重量。6,7,4-三羟异黄酮在体内直接绑定于CDK1和CDK2，导致抑制肿瘤中CDK1和CDK2的活性，此结果与我们的体外实验结果相一致。同样的，这些结果表明CDK1和CDK2 是6,7,4-三羟异黄酮在体内和体外抑制HCT-116细胞增殖的蛋白分子靶标。这些发现使我们深入洞察了6,7,4-三羟异黄酮的生物活性并且可能为新的癌症治疗机制建立了分子基础。 介绍 结肠癌是世界上最普遍的上皮恶性肿瘤中的一种，流行病学证据描述了营养和食物成分是涉及这种疾病形成的关键环境因素。虽然在结肠癌的治疗方面逐渐有了发展，但它仍然是男性与女性中最普遍的上皮恶性肿瘤。当进入晚期时，它是绝对无法治疗的。因此，需要新的预防治疗方法来减少它的发生率。 流行病学数据表明结肠癌的发生率在亚洲人口中相对的低，可能因为豆蛋白食物是亚洲人食谱中的一个主要成分。异黄酮，黄豆苷元和染料木素，是存在于大豆和豆蛋白食物中的主要生物活性分子，虽然黄豆苷元被认为活性比染料木素低，一些研究表明黄豆苷元的代谢物起到了化学防癌的效果。例如，雌马醇是黄豆苷元代谢物中最具有生物活性的一种。我们之前报道的是雌马醇而不是黄豆苷元起到了抗癌的效果因为细胞转化的抑制主要通过靶向丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调控激酶激酶1信号通路。最近，一些研究表明异黄酮在鼠的肝脏和人类肝脏代谢中遭受氧化的生物转化。黄豆苷元肝脏代谢物的主要产物之一是6，7,4-三羟异黄酮。然而，在结肠癌中这些肝脏代谢物的抗癌效果和分子机制并没有被报导。 不受限制的生长是癌细胞的一个独特特征，是癌症发展的一个主要必须过程，包括血管生成和转移。大量的报告表明细胞周期不受限制和癌变之间存在强烈的联系。增殖由CDK的不受限制导致，CDK是由周期蛋白复合物所激活的丝氨酸/苏氨酸激酶。在细胞周期之中CDK的水平持续保持，而周期波动和细胞周期的相由不同的CDK/周期蛋白复合物活化所控制。一些发现为细胞增殖中CDK/周期蛋白复合物的重要性提供了支持，即CDK活性的不受控制可在各种人类肿瘤中发现。CDK4/周期蛋白D，CDK6/周期蛋白D和CDK2/周期蛋白E复合物调控从细胞周期的G1期到S期的一系列进展。CDK2/周期蛋白A和CDK1/周期蛋白A在S期中起特殊作用以及在G2期控制进程。CDK1/周期蛋白B复合物是有丝分裂中重要的引发剂。因此，调控CDK的活性为癌症的预防与治疗提供了一个具有前景的策略。 这里，我们在人类结肠癌的体外和体内模型中研究了6,7,4-三羟异黄酮即黄豆苷元的一个代谢物的生物活性。6,7,4-三羟异黄酮比黄豆苷元的其他代谢物在HCT-116结肠癌细胞中起到更强的抗增殖作用。我们也报导了6,7,4-三羟异黄酮而不是黄豆苷元为CDK1和CDK2的一个有效地抑制剂，以及后来在HCT-116细胞的S期和G2/M期诱导细胞周期抑制。在一个异种移植的模型中，6,7,4-三羟异黄酮在裸鼠中显著地减少了肿瘤的体积和重量。与体外数据相一致，6,7,4-三羟异黄酮在体内直接绑定于CDK1和CDK2，导致这些肿瘤中CDK1和CDK2的活性抑制。这些研究结果表明引起6,7,4-三羟异黄酮抗癌活性的一个分子机制以及可能部分的解释了豆蛋白食物抗癌的化学预防作用。 缩写：ATP，腺苷三磷酸；CDK，周期依赖激酶；6,7,4-THIF，6,7,4-三羟异黄酮。 材料与方法 化学药品 RPMI1640培养基，基本培养基（BME），庆大霉素和谷氨酰胺购买于Invitrogen。6,7,4-三羟异黄酮来自Indofine Chemical Company。黄豆苷元和抗肌动蛋白购买于Sigma–Aldrich，周期蛋白B1，C