HPLC高效液相色谱技巧.pptVIP

如何用好HPLC …得到好结果的技巧! HPLC如何得到好的结果 … 流动相 缓冲液 / 溶剂选择, 梯度优化, 流速选择 脱气，流速稳定, 流动相制备 柱 高柱效, 二级作用力, 柱间变异, 温度控制 检测 灵敏度, 选择性, 温度波动影响 样品 提取方法选择, 样品溶剂选择, 氧气影响 仪器 性能, 稳定性, 耐用性, 易操作性 综合评估 分析技术的稳定性,可靠性, 定量准确性 ? 流动相? 溶剂混和率及其制备 (1) 下面的两种配制一样吗? 水 / 乙醇= 1/1 (v/v) 50%(v/v) 乙醇水溶液 ? 流动相? 溶剂混和率及其制备 (2) 水/乙醇=1/1 (v/v) 分别量取500ml水和乙醇, 然后混和 混和体积不是 1L. 50%(v/v) 乙醇水溶液. 加500ml乙醇于1L的容量瓶中, 加水至刻度. 水的比例更高. ? 流动相? 溶剂混和率及其制备 (3) 配制: 20mM 磷酸缓冲液 (pH2.5)  不一样的解释… Dihyrocodeine 出峰位置不一样 流动相缓冲能力弱… pKa 与流动相pH相近的酸和碱的峰形变差. 保留时间改变 峰面积改变 ? 定量错误!! 对绝对量响应的检测器  ? 流速不影响峰面积. 对浓度响应的检测器  ? 流速影响峰面积. *几乎所有的 LC 检测器均为浓度型检测器 两台泵进行混和时… 荧光检