海水养殖鱼类寄生新贝尼登虫(Neobenedenia)的数量形态学和分子生物学研究-海洋生物学专业论文.docx

稍孺摘 稍孺 摘 要 本文采黧形态学蕊察、数量形态学研究、RAPD分析藕28S rDNA基因簿深净戮 眈鞍等技术方法，觚不瀚层次对福建潜海养殖惫类暴发流行往寄生虫瘸害韵主要病 原——新贝尼登虫(NeobenedeniaYamaguti，1963)进行了研究。簖采如下： 1．光学显徽镜下镜裣发现，寄生在厦门海醒养殖高体辫(Seriola dumeriliRisso) 体表的新贝尼登虫大部分呈现出童己新贝尼登虫(Neobenedenia girellae Hargis)的形 态特征，即虫体较肥大、睾丸边缘有缺刻等，但也有一些虫体较瘦小、睾丸边缘光 滑无缺刻，表现出梅氏新贝尼登虫(Neobenedenia melleniMacCallum)的形态特征， 另有一蝗虫体介于：者之间：莆田和连江海区养殖的大黄鱼(Pseudosciaena crocea Richardson)体表以及厦门海区养殖的娩状黄姑鱼(Nibea miichthioides Chu,Lo et Wu) 体袭的虫体，则基本上星现梅氏新贝尼登虫的形态特征，少数表现为鳃新贝尼登虫 的特征。 2．采用数量形态学方法，对|~=melleni、她girellae、Ⅳpargueraensis Dyer, Williams and Bunkley-Williams、矩adenea Meserve和Ⅳisabeltae Meservc等5瓣掰 贝尼登虫12个易于观察和测量熬形态特妊进行生成分分掇嬲累类分辑，确定了对形 态鉴定羹敷较大的7个糖征，分别愚蠢吸器豹横辘秘纵辘长、体塞翻体长及翦镳长、 藏吸盘攒轴长彝咽横轴长等。这些形态特缝是静属划分兹羹要参数，京分类签定孛 应对它燃重点考察，综会分板。采耀最小琵瓷法终如聚类鬻，形态上嚣常穗近的嚣 令虫耱，N．metteni拳N．girellae寝现出缀近鹣亲缘关系，予糖离0．555簸最先聚合。 3。残躅RAPD技东，采用30个耱辊弓l锈辩不褥海区不两宿主的梅氏新贝尼登 斑避行遗传分析。结果表鞠，寄生予覆门海区不蔺懿类宿主(裔体瓣和箴狄黄菇鱼) 上静梅氏新援尼嚣虫的遗传差异为0．073，夺子生存子不同海区(连江和莆暖)弼一 宿主大黄鱼受体土梅氏新员陀登盛0．094的遗传差异。RAPD结荣还显示，鲩新贸尼 鼗虫和稳氏新贝危登虫两个斑种闯的遗传相似憔高达83．1~94．7％，只有S．3～16．9％的 遗传差异，接近予梅氏新贝彪登虫种内7．3～15．4％的遗传差髯。 4．通过特异住弓f物经PCR反应扩增出纪新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫的部分 28S rDNA萋因，获褥350bp左右的目的DNA片段。测序后进行排序比较，发现纪 擅要新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫的遗传相似度高达99．7％，在337bp同源序列中仅存在 擅要 新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫的遗传相似度高达99．7％，在337bp同源序列中仅存在 一个碱基的差异。而同为梅氏新贝尼登虫，莆田海区养殖大黄鱼鱼体上和厦门海区 养殖高体鲡鱼体上虫体的遗传相似度为99．41％。经与3种贝尼登虫的同源序列比较 后发现，贝尼登属三个虫种Benedenia lu和ni、B．rohdei和置seriolae种间的遗传差 异为2．08～11．73％，甚至大于囱己新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫O．3％的差异，结果与 RAPD分析相似，进一步在分子水平上印证了纪新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫应为 同一虫 在 目3个科10个属12个虫种的28S rDNA基因同 源序列 介于2．15～12．08％，属间的距离为5．18—20．43％， 科间的距离为19．70--29．09％。以MP和UPGMA方法作出的分子系统进化树与传统 分类系统基本一致，但两者在科的水平上有所不同，MP系统树为((CapsaJidae， Monocotylidae)，Udonellidae)，UPGMA系统树为((Capsalidae，Udonellidae)， Monocotylidae)。28S rDNA基因的该序列片段被证明非常适于单殖吸虫的分子系统 学研究。 关键词：新贝尼登虫数量分类RAID 28S rDNA序列分析 2 AbstractStudies Abstract Studies on the Neobenedenia(Monogenea：Capsafidae) from cultured marine fishes by numerical taxonomy and molecular analysis Abstract Parasitosis by the monogenean Neobenedenia has frequently occurred in Fujian fish farming net．cage in the recen