形态学石蜡切片制作技术标本取材动物的处死方法.PPTVIP

形态学实验技术 王世忠 1.非切片制作方法 组织分离标本 组织活体标本 细胞涂片标本 组织磨片标本 整体封存标本 组织铺片标本 形态学制片种类 2. 组织切片制作方法 石蜡切片 火棉胶切片 冰冻切片 树脂切片 碳蜡切片 电镜超薄切片 石蜡切片制作过程总体上可概括为9个步骤： 取材 固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 切片 染色 封固 形态学石蜡切片制作技术 标本取材 实验动物的处死方法 麻醉方法：吸入麻醉、注射麻醉 空气栓塞法 断头法 其它：断髓、股动脉放血法、脊髓捣毁法 材料的选择 狗：嗅粘膜 猫：肠系膜、足掌——环层小体 兔：肾、叶状乳头——舌 豚鼠：内耳 结缔组织铺片：大、小白鼠 间皮、内皮：青蛙 猪：肝小叶 牛、羊：心壁 标本取材 标本取材 取材的注意事项 离体或机体死亡大于两小时以上内部出现部分自溶，要求标本取材迅速 标本结构的完整性、方向性 根据动物死后组织改变快慢而定，先取胰腺、消化道 肝、脾、肾不要破坏被膜 眼球、睾丸、舌要整体固定 严禁机械损伤：镊子夹过、手压过不可使用 消化管取材：小肠要纵切、食道要横切 神经、动静脉、输精管、输卵管应固定在玻棒上 取材大小：3-4毫米 取消化道的动物应头天禁食 使用锐利的刀片 标本固定 固定是指从人体或动物体内取下的标本材料立即浸泡在化学试剂中，借助化学试剂的作用，将组织细胞形态结构保存起来，使其不改变形态结构或变质的一种手段。 固定方式 蒸气固定 灌注固定 标本固定 涂片固定 微波固定 标本固定 影响固定的因素 固定温度 标本大小 容积率 固定剂的穿透力 固定时间 PH值 常用固定剂的优缺点 标本固定 使胶原纤维肿胀，不能单独使用 抗细胞收缩，渗透性强 冰醋酸 昂贵，渗透力弱，不均匀 强氧化剂，植物制片最好的固定剂 锇酸 渗透力弱，易使组织收缩，易爆炸 防止过度硬化，增强染色能力 苦味酸 渗透力弱，有毒 强氧化剂 重铬酸钾 穿透力小，剧毒 作用迅速，胞浆着色鲜艳 升汞 (氧化汞) 使组织收缩 兼有脱水作用，无需洗涤 酒精 毒性大，致癌 渗透性较强，固定均匀，增加组织的韧性 甲醛 固定后的处理 组织的洗涤 脱水：组织内含有较多的水分，必须除尽组织内的水分，以利于透明、浸蜡及包埋。 透明：利用有些有机溶剂既能与脱水剂混合，又能与石蜡液相融合的特性，来置换标本 内脱水剂为浸蜡做准备的过程。 浸蜡：透明后的标本投入到温度适宜的熔化的石蜡内，置换出标本内透明剂的过程。 包埋 修块 切片 展片与粘片 染色 整体染色 标本块染色 切片染色 活体染色 金属浸染法 常见染色方法 免疫组织化学技术是以免疫学的抗原抗体反应为理论基础，用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内的相应抗原（或抗体）进行定性、定位、半定量检测，经组织化学的显色反应，利用显微镜进行实验结果观察的技术。 其优点是1.高度特异性2.敏感性高3.方法步骤统一 4.形态、功能和代谢密切结合。 免疫组织化学技术 主要步骤及注意事项: 一、脱蜡与水合 二、缓冲液洗涤 三、封闭内源性过氧化物酶：3%过氧化氢 四、抗原修复：暴露被封闭的抗原决定簇 免疫组织化学技术 谢谢