固相合成胸腺素α1-生物工程专业论文.docxVIP

南京工业大学硕士学位论文摘要 南京工业大学硕士学位论文 摘要 固相多肽合成技术是现代蛋白质化学研究的一项关键技术，也是目前多肽合 成中的一项常规技术。 本文首先简单介绍了固相多肽合成的基本原理、研究现状、存在的主要问题 及解决措施以及多肽合成中使用的检测方法。通过对Fmoc定量检测方法、水杨 醛检测方法以及_ez步b光谱法进行研究和比较，确定Fmoc方法作为C端氨基酸与 树脂连接效率的定量检测方法。 胸腺素Q 1(thymosin d 1)是Goldstein等1977年首次在小牛胸腺组织提 取物胸腺素第五组分(TF5)中分离出来的一种多肽，含28个氨基酸，分子量 3108，等电点4．2，其N端Ser乙酰化，氨基酸序列： Ac—Ser—Asp—Ala—Ala-Val—Asp—Thr—Set—Ser—G1u—Ile—Thr-Thr—Lys—Asp—Le u—Lys—Glu—Lys—Lys—Glu—Val—Val—Gtu—Glu—Ala—Glu—Ash 胸腺素n 1主要作为一种免疫增强药物，主要用于乙型肝炎的治疗，具有广 阔的国内外市场。通过比较国内外在胸腺素a I的各种合成方法，结合本实验室 的条件，采用以HMP树脂为合成载体，Fmoc一氨基酸为原料，在PE公司的ABl433A 型多肽合成仪上来合成胸腺素a 1。实验主要分为四个部分： 1．保护胸腺素Q卜HMP树脂复合物的合成 采用ABl433A型多肽合成仪的FastMocl．Ommol化学合成策略，在20。C下反 应合成胸腺素n l，结果表明，根据树脂增重计算，最终合成效率为81．9％。 2．保护胸腺素a卜HMP树脂复合物的切割 通过对多种不同切割试剂进行比较，选择最佳切割条件：95％ TFA／2．5％TES／2．5％H。0(v／v／v)为切割试剂，室温下反应1．5h。 3．胸腺素。1的分离纯化 在AKTA Explorel00型蛋白纯化系统上进行纯化，采用了大连依利特反相 C18柱，紫外220nm检测，通过比较，确定采用下面缓冲：A，25mmol醋酸钠 缓冲，pH 7．1；B，乙腈，在恢洗脱条件下，最终产品纯度最高达95．53％。 4．胸腺素a 1的性质鉴定 HPI．C分析结果表明纯化后的胸腺素n 1纯度为95．53％。质谱分析图给出了 摘要胸腺素d 摘要 胸腺素d 1的三电荷峰1037．8、双电荷峰1555．0。氨基酸分析结果也和理论上 ‘致。证明合成的就是胸腺素。1。 关键词：蚓相多肽合成Fmoc合成策略胸腺素a 1纯化ABl433A型多肽合成仪 lI 南京工业的大学硕士学位论文 南京工业的大学硕士学位论文 ABSTRACT Solid Phase Peptide Synthesis(SPPS)is a key technology of modem protein chemistry．SPPS has become a main way to peptide synthesis． The article firstly made a brief introduction of SPPS．Fmoc quantitation method，Salicylaldehyde method and IR method had been firstly studied and compared．Finally，we choosed Fmoc quantitation method for the quantitation ofthe synthesis efficiency between C-terminal amino acid and HMP resin． Thymosin a 1 was firstly isolated from calfthymus by Goldatein et al in 1977．It was an acidic peptide with all isoelectric point of 4．2，molecular weight of 3 1 08，its sequence was： Ac．Ser-Asp-Ala-Ala-Val—Asp—Thr-Ser-Ser-Glu-Ile—ThroThr-Lys—Asp—Leu—Lys—GI u．Lys．Lys．Glu．Val．Val．Glu．Glu．Ala．Glu．Asn Thymosin Q 1 had been demonstrated to be a potent immunologically active thymix polypeptide．Now clinically，it was mainly used for Heptitis B and had a broad market