gg动物胞培养和核移植技术11.ppt

动物细胞工程 过程 4、动物细胞生长特性 P44思考 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，讨论以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 1、无菌、无毒的环境 2、营养（与体内基本相同） 3、温度和PH 4、气体环境： 合成培养基 合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。 天然培养基 直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培养液，主要有血清、组织提取液、鸡胚汁等。 使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。 无血清培养基 动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效，但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限，成本高，限制了它的大量使用。 无血清培养基不加动物血清，在基础培养基中加入细胞生长有效因子，激素等。 P46 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。 氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。 血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。 因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。  6、动物细胞培养技术的应用 生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 用于检测有毒物质 用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 植物组织培养和动物细胞培养的比较 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 动物细胞的全能性特点 动物细胞特点： 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 思考 1、我们能否用植物组织培养的方法使动物细发育成动物个体？ 3、过程 动物体细胞核移植过程： P49【讨论2】 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 据统计, 按照出生健康后代和总操作卵之间的比值计算, 各种动物的克隆总效率分别为牛0~5％, 绵羊0.4％~4.3％, 山羊0.7％~7.2％,小鼠0.2％~5.8％, 猫0.3％, 兔0.3％, 大鼠0.2％,猪0.1％~0.9％, 骡子0.9％, 马0.2％。经过10 年的发展, 体细胞核移植效率有所提高, 尤其是牛, 但其最高效率也仅为10％。 日本东京国立传染病 研究所实验动物开发室小仓淳室长在著名生物科学杂志《Nature Genetics》上发表了对克隆动物的研究结果：克隆小鼠的寿命要比自然交配出生的小鼠寿命明显缩短。小仓室长对死亡的克隆小鼠进行病理检查发现：死亡小鼠均患有肺炎，一部分小鼠合并有肝脏异常病状。小仓室长以同种方法另外制作了20只克隆小鼠。并委托日本东北大学农学部的西田朗教授对其进行免疫系统机能的检查。结果发现：这些克隆小鼠的抗 体生成能力比自然交配出生的小鼠明显降低。 　　 可以 利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛。 首先从卢辛达耳朵上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。 在研究方面，