海风藤对β-APP基因表达影响的实验研究-神经病学专业论文.docx

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论 文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本 文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：!目送i鱼 日 期：塑!：竺：!』 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允 许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他 复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：趣鼬导师签名：杜日 期：趔；：丝!』 山东大学硕士学位论文海风藤对B—APP基因表达影晌的实验研究 山东大学硕士学位论文 海风藤对B—APP基因表达影晌的实验研究 研究生：胡洪涛 导师：韩恩吉教授 摘 要 背景与目的：神经细胞外的老年斑(Senile Plaques，SP)和神经细胞内的神 经原纤维缠结(Neurofibrillary Tangles NFD是阿尔茨海默病(Alzlleimer’Disease， AD)亦即老年性痴呆(Senile Dementia)的两个最基本最具代表性的组织病理改变。 淀粉样前体蛋白(8．Amytoid PrecursorProtein，B-APP)是一个由695．770个氨 基酸组成的跨膜糖蛋白，由它代谢产生的淀粉样蛋白(15．Amyloid Protein，p。AP) 是其中的一个片段，由B．APP细胞膜外的28个氨基酸和跨膜部分的12个氨基酸 组成。B-APP可以通过剪切代谢途径形成B-AP。自从发现B-AP是阿尔茨海默 病患者大脑老年斑的核心成份以来，国内外掀起了对B-AP的研究热潮。现代研 究证实它与AD有着密切的关系。体内外试验均显示B．AP能造成AD样的病理 变化，诱导神经元变性。B．AP的沉积形成sP是AD发病过程中的关键环节， 在各种AD的致病因素中起“共同通路”的作用。对家族性AD和散发性AD研 究中均发现AD高危患者脑内0一APP表达异常增加。从而促发并加重B．AP的生 成与沉积。基予以上研究，如果B．APP基因表达受到抑制，13．AP的来源将减 少，沉积也会相应减轻，AD就有可能得到有效防治。本实验应用人类神经母细 胞瘤细胞细胞培养和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)探讨海风藤是否能选择 性抑制B．APP基因的表达。 方法：常规培养人类神经母细胞瘤细胞(SK．N-SH)．细胞呈指数分裂期进 行各种实验。实验由二部分组成：第一部分：应用细胞存活率、细胞集落研究 山东大学硕士学位论文25．oeYL、5．09／L两个浓度海风藤对神经细胞的直接作用，观察海风藤对细胞的毒 山东大学硕士学位论文 25．oeYL、5．09／L两个浓度海风藤对神经细胞的直接作用，观察海风藤对细胞的毒 性。第二部分： 1、海风藤减少B．APP mRNA与剂量的关系：海风藤浓度分别 为25．Og／L、5．09／L与细胞接触6小时。2、海风藤减少B．APP mRNA与时间的 关系：海风藤浓度25．Og／L，海风藤与细胞接触时间分别为6小时和16小时a细 胞处理完成后，提取全部mRNA，应用逆转录反转成cDNA，再经过聚合酶链反 应扩增0，APP cDNA，最后聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色。凝胶分析采用生 物电泳图像分析仪，测定B—APP光密度，对照基因为B．Actin。 结果： 1．海风藤试验浓度内(5．09／L．25．09dL)，各种实验未发现其对细胞的毒性作 用。SK-N．SH接触海风藤24小时光镜下无形态学改变。SK．N．SH接触海风藤6 小时和24小时，细胞存活率，细胞集落监测未发现异常。 2．海风藤能选择性抑制B．APP基因的表达，而且这种抑制作用随海风藤的 浓度增加而增强；随海风藤与细胞接触时间的延长而增强。 结论： 1．25，09／L、和5．09／L的海风藤对人类神经母细胞瘤细胞无神经毒性作用。 2．海风滕能选择性地抑制人类神经母细胞瘤细胞B．APP mRNA的表达。 3．海风藤减少B．APP mRNA表达随药物浓度的增加而增强。 4．海风藤减少13．APP mRNA表达随作用时间的延长而增强。 5．海风藤选择性地抑制B—APP基因表达的研究，为进一步探索其有效成 分、作用机制和开展体内研究提供了实验依据，为开辟防治AD的新途径奠定了 实验基础。 关键词：阿尔茨海默病 海风藤 淀粉样前体蛋白基因 一些至查兰堡主堂堡笙苎——INHI