jjw-细周期-2011.ppt

Chen（Chen, 2009）提出联合使用黄芩素和水飞蓟素，对肝癌HepG2细胞显示良好的杀伤作用，对正常肝细胞（Chang liver）活性没有影响，两种药物联合应用增加了G0/G1期细胞的百分率，减少了S期细胞的百分率，上调了Rb、p53、Cip1/p21和Kip1/p27蛋白，下调了Cyclin D1、Cyclin E、CDK4和phospho-Rb。 Chen L, Willis S N, Wei A, et al. Differential targeting of prosurvival Bcl-2 proteins by their BH3-only ligands allows complementary apoptotic function. Mol Cell, 2005, 17(3): 393-403 Varghese（Varghese, 2005）采用肝癌HepG2和 Hep3B细胞研究水飞蓟宾的抗肿瘤作用，发现水飞蓟宾强烈抑制HepG2和Hep3B细胞增殖，且对Hep3B细胞的增殖抑制效果更强。对于HepG2细胞，水飞蓟宾导致G1期阻滞；对于Hep3B 细胞，导致G1 和G2-M 阻滞。对于这2种细胞，水飞蓟宾诱导Kip1/p27表达，减少cyclin D1、cyclin D3、cyclin E、CDK2和CDK4表达水平。 Varghese L, Agarwal C, yagi A, Singh RP, Agarwal R. Silibinin efficacy against human hepatocellular carcinoma. Clin Cancer Res, 2005,23(11):8441-8448. 第一部分： 细胞周期概况： 间期：G0，G1，S，G2 分裂期：M 2. 实验发现一些蛋白和激酶调控细胞周期 第一部分： 细胞周期概况： 间期：G0，G1，S，G2 分裂期：M 2. 实验发现一些蛋白和激酶调控细胞周期 MPF的发现： PCC：prematurely condensed chromosome 染色体超前凝集 MFP：mitosis-promoting factors 细胞 促分裂因子 APC：anaphage promoting complex 细胞分裂后期促进复合物 Cyclin B的性质 P468实验：卵提取物影响精子染色质的周期改变。 （1）加入未经处理的蟾蜍卵提取物，使精子染色质存在细胞周期事件； （2）加入RNA酶水解的卵提取物，使精子染色质的细胞周期消失。 （3）当RNA酶处理卵提取物 + 野生型cyclinB mRNA，精子染色质的周期重现。 （4）当加入RNA酶处理卵提取物加不能降解的cyclinB mRNA，精子染色质致密化，核膜溶解。但有丝分裂晚期事件染色体去致密化和核膜形成都不发生。 说明： 卵提取物中Cyclin B对细胞周期必需。 且：cyclin B降解 对精子染色质的细胞周期结束是必需的。 Cyclin B的降解： Cyclin B的N端含有destruction box，C端有Lys残基。结合泛素。 泛素：E1 泛素激活酶：uniquitin-activating enzyme E2泛素结合酶: ubiquitin-conjugating enzyme E3泛素连接酶：ubiquitin ligase 细胞分裂后期促进复合物（anaphase promoting complex, APC） MPF (CDC2+ cyclinB ) 活性在分裂中期达到高峰。 激活APC，cyclin B多泛素化，导致cyclin B降解，使MPF失活，进入下一个周期。 Cyclin B在细胞周期中连续合成，但是在有丝分裂的间期活性升高，在有丝分裂晚期突然下降。 第二部分 3. Cyclins-CDKs-CKIs调控网络 Cyclins-CDKs 相互配合 Cyclins 不同时相而出现 CDKs 不同时相而出现 4. G1—S期转折 5. G2—M期转折 6. CKIs 周期蛋白(A, B)分子的N端含有破坏框。 CDK的分子量一般为35～40kD，不同CDK的氨基酸组成有40%以上的同源性。 典型的CDK催化亚基的活性中心约由300个氨基酸残基组成，当处于单体或非磷酸化状态