血清补体总活性测定.PPT

第11章 补体和循环免疫复合物的检测 补体（C）： 是一组存在于人和动物血清与组织液中的具有酶活性的不耐热的糖蛋白 。 补体性质不稳定 0~10 ℃条件下活性只能保持3~4d 56℃、30min灭活 多种理化因素（射线、机械振荡、酒精） 均可破坏补体 所以：补体活性检测要快，保存在－20 ℃ 第一节 补体活性和组分的检测 50％溶血标准管 2%绵羊红细胞悬液0.5ml H2O2.0ml 1.8%NaCl溶液2.0ml 2%SRBC悬液0.5ml 50％溶血的总补体值 CH50（U/ml）＝ 1/血清用量 × 稀释倍数 第二节 补体结合实验（CFT) 补体参与的抗原抗体反应 方法评价 ①灵敏度高。比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定0.05μg/ml的抗体。 ②特异性强。各种成分都事先滴定，选择最佳比例，出现交叉反应的机率小。 ③ 易于普及，试验结果显而易见； ④试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用分光光度计。 方法评价 但参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁，所以常常被其他方法所取代。 但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很好的试验。 第三节 循环免疫复合物的检测 概述 免疫复合物是机体内抗原抗体形成的抗原抗体复合物，沉积在血管壁、皮肤、脏器的免疫复合物称为局部免疫复合物，随血液循环的称为循环免疫复合物。 局部免疫复合物用免疫组化法检测，而循环免疫复合物检测技术分为抗原特异性检测技术和非抗原特异性检测技术两类。 一、PEG（聚乙二醇）沉降法： 1、? 原理：低浓度的PEG能选择性地沉淀IC，一般PEG的最终浓度选择3.5％，PEG＞5％将失去对IC的选择性。 2、? 方法：PEG（7％）+等量待检血清→4℃16-18小时后离心沉淀→NaOH溶解→280nm测定A值，A＞0.21判为阳性。 3、? 评价：简单方便，既可检测又可以用于分离；但特异性差，血清中的大分子蛋白质易造成假阳性。 二、ELISA测定循环免疫复合物 ： C1q固相法 1、? 原理； 固相C1q+待测血清（IC）+酶标抗人IgG+底物 ——根据颜色深浅判断IC含量 2、? 评价： 敏感度较高 重复性好 结果稳定性易受影响 免疫复合物检测的临床意义 1、? 可作为评价疾病的活动情况及其对治疗的反应性、恶化预兆和疾病分期的指标。 2、? 可帮助诊断某些疾病。 3、? 可协助研究疾病的发病机理。 * * 一、血清补体总活性测定（CH50试验） 原理： 在溶血反应中，当红细胞和溶血素定量时， 在规定的反应时间内，溶血程度与补体的活性 呈正相关。（但非直线关系） Ag 激活补体 溶血 红细胞 溶血素 应用：正常值：50-100U/ml 增高：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等 降低：严重肝病、某些自身免疫性疾病 （如肾小球肾炎、SLE等) 以引起50%溶血所需 要的最小补体量为1U 溶血率 70 50 30 0 （%） 血清补体 CH50测定方法 试管号 1：20稀释血清 缓冲液 2U溶血素 2%SRBE 0.10 1.40 0.5 0.5 0.15 1.35 0.5 0.5 0.20 1.30 0.5 0.5 0.25 1.25 0.5 0.5 0.30 1.20 0.5 0.5 0.35 1.15 0.5 0.5 0.40 1.10 0.5 0.5 0.45 1.05