第五章SEM样制备技术NEW.pptVIP

第五章 SEM样品制备技术 第一节 SEM样品制备技术概述 （三）、冰冻干燥 三 样品装台(粘胶) 四 样品表面的导电处理 1. 概念：采用特殊装置将电阻率小的金属(Au,Pt,Ag,Pd)离子溅射或真空蒸发后覆盖在样品表面的方法。 2. 作用： (1) 消除荷电效应，提高二次电子发射率 增加信噪比，提高图像反差; (2) 提高样品表面的机械强度，增强样 品耐受电子的轰击能力; (3) 防止来自组织内部的信息参与成像。 3. 对金属膜的要求 (1)膜的厚度要均匀,膜要薄,20nm左右 (2)膜本身无结构，或结构很细微 (3)二次电子发射率要高 (4)耐电子束的轰击，化学稳定性好 4.具体方法 A. 离子溅射镀膜法 (1)离子溅射： 在低真空中进行辉光放电时，阴 极物质有飞散的现象。 (2) 离子溅射仪的作用： 离子溅射（0.01~0.1Torr） 离子蚀刻（要求高真空，高电压条件） (3)离子溅射仪构造： ① 真空部分:真空泵、真空钟罩、真空表、 进气阀 ② 溅射部分： ﹡金属靶：溅射时做阴极,蚀刻时做阳极 （金属: Au,Pt,Pd) ﹡样品台：溅射时阳极，蚀刻时阴极 ﹡靶台距离调节器： ③ 控制部分：电压调节器、电流表、定 时器，阳极阴极转换器 (4) 离子溅射仪工作原理 放入样品→抽真空→加高压→产生电场→残余气体分子电离→正粒子轰击金属靶→激发金属颗粒→金属颗粒依附于样品表面→金属膜形成 (1) 原理:高真空下,使某些金属物质加热到熔点 以上,真空蒸发成极细的颗粒沉积到样 品表面,在样表形成薄金属膜. (2)仪器:真空喷镀仪(10-5Torr) 5. 离子溅射法与真空镀膜法比较 1. 定义： 组织导电法:利用重金属盐溶液对生物体的蛋白质、脂肪及淀粉等成分的结合作用，使样品表面离子化或产生导电性能很好的金属化合物，从而提高样品耐受电子轰击的能力和导电率。 2.导电液应具备的条件： (1) 能对组织染色 (2)组织结构保存完好 (3) 不污染样品 (4)不掩盖样品超微结构 (5) 导电性能好，消除荷电效应 (6) 二次电子发射率高，亮度大,图像反差强 3、常用处理方法 (1) 碘化钾-碘导电染色法： 碘化钾20g+碘0.2g+双蒸水100ml＋2.5% 戊二醛10ml+葡萄糖0.2g (2) 碘化钾－醋酸铅导电法 A液：碘化钾 20g 碘0.2g,加双蒸水100ml B液：氢氧化钾4g 醋酸铅1.2g 加水至100ml 用时需稀释，1分母液＋3分水 第三节 特殊样品制备技术 1. 无水乙醇冷冻割断法: 优点:制作时间短,不易弄脏容器 步骤:取材固定脱水→100%乙醇包埋→冰 冻固化→冷冻裂断→融化乙醇→临界点 干燥→装台粘胶 2. 70%乙醇冷冻干燥 特点:经济简单,但不能人为确定断裂面 步骤:准备→冷冻→自然断裂→冷冻干燥 →装台→喷金 八、铸型技术 1. 概念： 为了研究空腔脏器特别是血管系统复杂的立体分布，先向腔内注射某种成形物质，待该物硬化后再把组织腐蚀去掉，剩下的成形物即能显示血管系统的立体分布，这种技术称铸型技术。 2. 常用的铸型剂： 甲基丙烯酸酯、聚苯乙烯及其共聚物以及ABS等。ABS是一种树脂，为丙烯晴、丁二烯和苯乙烯的三元共聚物，是理想的铸型剂。 3. 用ABS制作血管铸型样品的一般步骤 ⑴ 灌流和注入铸型剂 ⑵ 腐蚀和清洗 ⑶ 显微解剖和剥制铸型 ⑷ 干燥和镀膜 作业 1、名词解释：临界点 离子溅射 中间剂 组织导电法 铸型技术 2、SEM样品制备中，需要对样品进行干燥处理， 而在TEM样品处理过程中只须对样品脱水处 理，试分析其原因。 3、SEM与TEM的样品前处理过程中操作方法有 何异同。 4