db33t455―2003动物毛发中盐酸克伦特罗残留的检测方法.docVIP

DB××/T ××××—2003 PAGE 2 PAGE 1 浙江省质量技术监督局 发布2003-11-08实施2003-10-23发布动物毛发中盐酸克伦特罗残留的检测方法The analysis of clenbuterol hydrochloride in animal hairDB33/T 455—2003DB33浙江省地方标准ICS 71.040 浙江省质量技术监督局 发布 2003-11-08实施 2003-10-23发布 动物毛发中盐酸克伦特罗残留的检测方法 The analysis of clenbuterol hydrochloride in animal hair DB33/T 455—2003 DB33 浙江省地方标准 ICS 71.040 G 04 备案号：14770-2004 DB33/T 455—2003 PAGE I 前 言 本标准由嘉兴市卫生监督所提出并归口。 本标准由嘉兴市卫生监督所、浙江省疾病预防控制中心、浙江省畜产品质量安全检测中心、嘉兴市疾病预防控制中心负责起草。 本标准主要起草人：吴小龙、吴平谷、宣士荣、葛志坚、邹忠明、 汪刚、王明龙、吴新民。 PAGE 3 动物毛发中盐酸克伦特罗残留的检测方法 范围 本标准规定了以酶联免疫吸附（ELISA）法和气相色谱-质谱联用（GC/MS）法测定动物毛发中盐酸克伦特罗的方法，规定气相色谱-质谱联用法为仲裁法。 本方法适用于动物毛发中盐酸克伦特罗残留量的测定与仲裁。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 DB33/T 307-2001 可食性动物组织中盐酸克伦特罗残留量的检测方法 DB33/T 308-2001 饲料中盐酸克伦特罗含量的检测方法 DB33/T 309-2001 动物尿液中盐酸克伦特罗残留量的检测方法 酶联免疫吸附法 原理 利用固相酶联免疫吸附原理，将盐酸克伦特罗特异性抗体(羊抗兔IgG )包被于聚苯乙烯微量反应板中，加入毛发提取液、盐酸克伦特罗标准品、酶标记物、盐酸克伦特罗抗体于微孔中，使毛发提取液（未知抗原）和酶标记物中的盐酸克伦特罗抗原（已知抗原）与抗体进行免疫竞争反应，未反应的酶记标物在洗涤中被清除，结合了的酶可以由显色物显示出来。用目测法或酶标法来判断。显色的强弱与样品中的盐酸克伦特罗浓度成反比。 试剂和材料 以下所用的试剂和水，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为重蒸水。 盐酸克伦特罗固相酶联免疫试剂盒（德国 r-Biopharm公司或类似产品）。 预包被微孔条。 标准品（6瓶×300μL/瓶，浓度分别为0ppt、100ppt、300ppt、900ppt、2700ppt、8100ppt ）。 盐酸克伦特罗酶标记物。 盐酸克伦特罗抗体。 基质液。 终止液。 缓冲液。 1%吐温-80、体积分数为3%乙醇/乙酸乙酯、体积分数为5%乙醇/乙酸乙酯、乙酸乙酯、50%盐酸、1mol/L氢氧化钠、饱和氯化钠、体积分数为50%乙醇/乙酸乙酯。 盐酸克伦特罗SLH净化柱（1000mg/5mL，SLH小柱为商品名，给出这一信息是为了给本行业标准的使用者提供方便，而不是标准主管部门对这一产品的认可）或同等效果的净化柱。 设备与器材 酶标仪。 洗板机。 离心机（3000 r/min -4000r/min）。 超声清洗仪。 振荡器。 水浴锅。 旋转蒸发仪。 样品处理 清洗：取毛发加1%吐温-80溶液在超声清洗仪中洗涤20min，然后用蒸馏水冲洗干净，用滤纸吸干；将毛发在50℃干燥2h，放在干燥器中待测。 水解：将毛发剪碎混合均匀，准确称取0.1ｇ，加入１mol/L氢氧化钠溶液２mL，在80℃水浴中保温１h后冷却。 萃取：在水解液中加１mL饱和氯化钠溶液，用50％盐酸调节ＰＨ至10左右，加５mL乙酸乙酯振荡，离心分出乙酸乙酯相，乙酸乙酯相用氮气吹干。 净化：加2ｍL体积分数为3%乙醇/乙酸乙酯溶液溶解剩余物，移到预先用体积分数为3％乙醇/乙酸乙酯溶液淋洗的盐酸克伦特罗SLH净化柱上，然后用５mL体积分数为5%乙醇/乙酸乙酯溶液洗脱除杂，最后用10mL体积分数为50%乙醇/乙酸乙酯溶液洗脱，收集该洗脱液，用氮气吹干。用水4mL溶解剩余物，待测。 测定（或参考类似产品说明书） 将试剂盒各组分取出，平衡至室温(20℃-25℃)。 以1：11的比例吸取盐酸克伦特罗抗