第四章　药用植物的种质资源.pptVIP

7.QTL定位 运用WinQTLCart v215 软件, 采用复合区间作图法(C IM) 对株高、平均节距及第一雌花开花期(从定植到第一朵雌花开放的天数) 进行分析。以似然比LR (L ikehood Ratio) 大于1115, 即LOD 大于215作为判断QTL存在的阈值。QTL 的命名按照http: / /www1graingenes1org的方法并略有改动,即: “Q +性状名称缩写+染色体编号” 三、重要农艺性状基因的标记 1．近等基因系 是将携带某一目标主基因或数量性状基因位点（QTL）供体亲本染色体片段导入轮回亲本遗传背景中的永久性稳定株系。 除了某一两个基因外，其他基因都相同的两个遗传材料，通常是经过饱和回交形成的除了目标性状有差异，其他遗传背景完全相同的两个遗传材料（品系）。 2．群体分离分析法 假设用某一植物的抗病品种和感病品种杂交，在F2世代，抗病基因发生分离。 根据抗病表现将分离的群体植株分成2组，一组为感病的，另一组为抗病的。 然后分别从2组中挑选出5~10株感、抗极端类型的植株提取DNA，等量混合组成感抗DNA池，对两个混合的DNA池进行多态性分析，筛选出多态性差异的标记。 再分析所有的分离单株，分析目标性状基因的连锁关系以及连锁的紧密程度。 实例-菜薹抽薹性状的ISSR和SRAP分析 1.材料 早抽薹品种CT07和晚抽薹品种T0601杂交并自交获得F2分离群体。 2007年9月1日将双亲和F2进行育苗, 10月1日定植双亲和F2单株于扬州帮达蔬菜研究所试验田。定植缓苗后,对77 株F2单株分别编号并对幼嫩新叶进行取样;同时对双亲也进行取样,以备提取DNA。 2.方法 （1）DNA的提取和DNA池的构建：DNA的提取方法采用改良过的CTAB 法。 对F2群体中每株观察现蕾时间,现蕾标准为肉眼能看见花蕾。选取早现蕾(早抽薹)单株(定植后38 d)和晚现蕾(晚抽薹)单株(定植后95 d)各10株组成早现蕾、晚现蕾基因池,用于ISSR和SRAP分析。 （2）ISSR和SRAP反应体系及反应程序 （3）引物的筛选与标记的验证 用T0601和CT07 2个亲本对45条ISSR引物和20对SRAP引物组合进行筛选,用在亲本间有差异的引物对DNA池进行筛选。再用在DNA池间表现相同多态性的引物对F2群体单株进行验证。 （4）　数据统计分析 分别以1和0记录植株类型中的早现蕾、晚现蕾及电泳谱带的有无,根据筛选出的具有多态性的引物扩增结果,建立ISSR 和SRAP 数据库,使用JoinmapV310分析分子标记,设最小LOD 值为310, 并用Kosambi函数将重组值转换成图距单位( cM) 。 （5）　候选引物的群体单株验证 （6）ISSR标记和SRAP标记与早抽薹基因的连锁分析 四、种质资源分子标记辅助育种的应用 1. 分子标记辅助选择育种需具备的基本条件 ①分子标记与目标基因间的遗传距离是共分离或者紧密连锁，一般连锁小于5cM才有效用于MAS。 ② 要有简便快捷的DNA自动化提取方法及检测方法，便于用大群体分析及操作。分子标记类型最好是PCR标记。 ③ 检测技术应可靠，有很高的重复性，经济实用。 ④要有能够进行多数据处理的计算机分析软件。有了这些条件就可很好的进行育种辅助选择。 2. 分子标记辅助选择育种方法 （1）导入有利基因 药用植物在栽培过程中存在成分下降和抗病性减弱等退化特性：可选择抗性较强的品种与栽培品种进行多次回交，在每个回交世代对有利基因和优良综合性状进行选择，改良品种。 传统回交方法不能直接鉴定重组个体：盲目性大，回交代数多，有时达20代都完成不了，效率低。 应用分子标记辅助选择育种技术可快速、直接鉴定重组个体：利用与目标有利基因紧密连锁的两侧分子标记，可直接筛选到在该片段发生重组的个体。一般经过2～3代筛选就可以将有利基因导入，达到培养优良品种。 （2）有利基因聚合 在育种过程中可以先把亲本的有利基因进行定位，然后利用杂交或回交把有利的基因转移到一个品种中去，实现有利的基因聚合在一起，从而达到培育优良品种的目的。 分子标记辅助选择育种可以克服常规育种时间长的缺点，快速把有利的基因聚合在一起。 第三节 药用植物种质资源的分子评价 【学习要点】 1. 掌握药用植物种质分子评价的内容。 2. 了解药用植物种质资源的评价方法。 种质资源评价包括种质资源的真伪、优劣。 种质鉴别的手段有很多，有形态特征观察法、群体测定法、居群识别法、表型测定法、系谱分析法、分子测定法等。 鉴别手段和标准的不同可以鉴别出不同层次的种质，如亚种、变种、品种、种群、居群、家系、无性系、株系等。 药用植物种质资源具有独特的评价标准，其核心是临床疗效评价。 临床疗效是判别种质资源优劣的最根本和最终标准，临床疗效的物质