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乳腺癌har-2基因荧光原位杂交(fish)检测报告单(共2篇).docx 12页

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乳腺癌har-2基因荧光原位杂交(fish)检测报告单(共2篇)   乳腺癌HER2FISH检测-检测意义、建议及标本准备   HER2与乳腺癌   乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种,正以每年3%~4%的速度急剧上升,已成为女性的第一杀手。临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达。HER2基因(又名HER2/neu,c-erbB-2)位于17q12,是表皮生长因子受体家族成员之一,HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。HER2编码相对分子量185KD的跨膜受体样蛋白,具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌预后判断因子,HER2阳性的乳腺癌,其临床特点和生物学行为有特殊表现,治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。   HER2检测方法有免疫组化和荧光原位杂交等。《XX年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南XX版》均强调:FISH是检测HER2基因状态的金标准。   一.检测意义   1.判断预后:HER2阳性的乳腺癌浸润性强,无病生存期短,预后差。   2.指导治疗:HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物产生耐药。HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感,宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药物方案;HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin等靶向药物治疗。   二.检测建议   IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高,但也存在着差异,数据统计如下表1和表2示,对于IHC2+样本必须要用FISH进一步确认结果;0、1+或3+,根据条件,可再做FISH验证。   IHC   阴性   1+   2+   3+   表1:(XX)HER2AmplificationRatiosby   FluorescenceInSituHybridizationandCorrelation   withImmunohistochemistryinaCohortof6556Breast   CancerTissues.ClinicalBreastCancerFISH阳性阳性率  表2:XX年卫生部科教司牵头组织全国73家三级以上医院历时2年完成“荧光原位杂交技术用于乳腺癌患者Her-2检测的临床研究”课题,检测标本达3368例   因此,《XX年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南》均建议先进行HER2蛋白的IHC检测,IHC2+样本进行ISH检测。   《XX年NCCN乳腺癌临床实践指南》   三.样本准备:   1.标本类型:(1)手术切除标本;(2)粗针穿刺活检标本;(3)活检标本。   2.标本固定:所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定。固定时应将标本每隔5~10mm切开,并可在组织间嵌入纱布或滤纸等物。固定液量与所浸泡组织的比例应足够。   固定时间以6—72h为宜。   3.固定液类型:4%中性(磷酸缓冲)甲醛固定液。   4.组织切片:(1)切片厚度3-5um;(2)应有HE染色切片作为对照。   四.临床上哪些患者需要进行HER2检测   1.所有乳腺原发性浸润癌都应进行HER2检测;   2.只要能获取肿瘤组织,对复发灶或转移灶也应该进行HER2检测;   3.如HER2检测结果为阴性,但疾病复发且生物学行为提示可能为HER2阳性肿瘤时,应重复HER2检测;   4.如HER2检测结果与组织病理学特征不相符时,如组织学分级为I级的浸润性乳腺癌HER2阳性,应重复HER2检测。   组织学1级的类型腺癌:   ?浸润性导管或小叶癌,ER和PR阳性   ?小管癌   ?粘液癌   ?筛状癌   ?腺样囊性癌且常为三阴性   乳腺癌HER2FISH检测-判读   一.信号观察流程   1.首先在HE/IHC切片上确认肿瘤区域;   2.在10×物镜下,于FISH标本上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构;   3.在40×物镜下扫描整张切片,观察是否存在异质性,要求至少找到2个浸润癌区域,计数至少20个浸润癌细胞。满意的标本应是75%以上癌细胞核中有杂交信号;   4.在100×物镜下观察癌细胞核的FISH结果进行信号计数,注意上下调整焦距,以免遗漏信号。   二.实验失败、不能判读的情况   1.因操作等原因,细胞核被损坏,边界不完整;   2.组织过度消化,细胞核边界不完整,DAPI染色浅;   3.组织消化不足,25%以上的细胞核无信号;   4.自发荧光很强或细胞核分辨差,10%细胞核外有信号。   三.计数要求   1.计数区域可结合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识;   2.选择具较好核分界的区域,要求细胞核大小基本一致、边界完整,DAPI染色均匀、核无重叠,绿色着丝粒信号清晰;   3.随机计数确定的肿瘤区域

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