叶绿素含量的测定实验报告.docx

叶绿素含量的测定实验报告 　　深圳大学实验报告　　课程名称：　　学院：生命科学　　报告人班级：　　实验时间：　　实验报告提交时间：　　教务处制　　叶绿素a测定实验报告　　实验目的及意义　　水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。　　水样的采集与保存　　1.确定具体采样点的位置　　2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面处采集水样　　4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号　　6.用GPS同步定位采样点的位置　　仪器及试剂仪器：　　1.分光光度计2.比色池：10mm　　3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜4.研钵　　5.常用实验设备试剂：　　1.碳酸镁悬浮液：1%。称取细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。每次使用时要充分摇匀　　2.乙醇溶液　　实验原理　　将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。　　实验步骤　　1.浓缩：在一定量的试样中添加碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm　　的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。　　2.提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,　　把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。　　3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。将上清液移　　入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。　　4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长　　750,663,645和630mm的吸光度。　　结果显示　　从各波长的吸光度中减去波长750nm的吸光度，作为已校正过的吸光度D，按下面公式计算叶绿素a的浓度：　　Ca=(—+×V1)/(V2L)　　式中：Ca——叶绿素a的浓度，mg/L;V1——提取液的定容体积，mL;V2——过滤水样的体积，LL——比色池的光程长度，mmD——已校正过的提取液吸光度　　(七)注意事项　　1.使用的玻璃器皿和比色皿均应清洁、干燥、无酸，不要用酸浸泡或洗涤。2.750nm处的吸光度读数用来校正混浊度。。　　3.使用斜头离心机时，容易产生二次悬浮沉淀物。为了减少这一困难，使用外旋式离心机头，在离心之前瞬间加入过量的碳酸镁。　　4.因为叶绿素提取液对光敏感，故提取操作等要尽量在微弱的光照下进行。5.吸收池事先要用乙醇溶液进行池校正。　　6.750nm的吸光度是检查乙醇溶液浊度的。用10nm吸收池，750nm的吸光度在以上时，应将溶液再一次充分地离心分离，然后再测定其吸光度。　　一、实验目的：　　1、了解植物组织中叶绿素分布及性质。　　2、掌握测定叶绿素含量的原理和方法。　　3、了解紫外分光光度计的用法。　　4、了解一阶导数的含义。　　5、了解如何如何排除互相干扰。　　二、实验原理：　　叶绿体中的色素都能够溶解于有机溶剂丙酮中，所以，可以用丙酮提取叶绿体中的色素。　　层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。根据叶绿体中的四种色素在层析液中的溶解度不同来进行分离，溶解度高的在滤纸上扩散的快，溶解度低的扩散地慢。溶解度最高的是胡萝卜素，它随层析液在滤纸上扩散得最快，叶黄素和叶绿素a的溶解度次之；叶绿素b的溶解度最低，扩散速度最慢。这样，四种色素就在扩散过程中分离开来。　　叶绿素a和叶绿素b的分子结构相似，它们的吸收光谱、荧光激发光谱和发射光谱重叠，用常规分光光度法和荧光方法难以实现其同时测定。但利用一阶导数光谱技术和同步荧光技术，消除了叶绿素a和叶绿素b的光谱干扰，可以同时测定它们的含量。　　在600~700之间胡萝卜素一阶导数为零，没有吸收，在某个特定波长下，叶绿素a有一定的导数值，而叶绿素b的导数为零；同理，在另一个特定波长下，叶绿素b有一定的导数值，而叶绿素a的导数值为零。这样可以实现叶绿素b和叶绿素b的同时测定，又不受胡萝卜素的干扰。　　三、实验材料：　　1、仪器　　干燥的定性滤纸、烧杯、研钵、玻璃漏斗、分液漏斗、剪刀、小试管、试剂瓶、药勺、量筒　　四、实验方法与步骤：