外周血单个核细胞分离.pptVIP

外周血单个核细胞的分离及活力测定 Isolation and storage of PBMC and viability test 实验原理 人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞。 单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同。因此利用一种介于1.075-1.090之间的聚蔗糖-泛影葡胺（ficoll-hypaque）分离液作密度梯度离心，离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布,从而分离出PBMC。 用毛细吸管轻轻插入灰白色层，沿管壁轻轻吸出该层的单个核细胞，盛入另一支离心管中。 将所得到的PBMC悬液用5倍体积的Hanks液或RPMI-l640洗涤2次，1500 rpm 5min。 台盼蓝染色测定细胞存活率 台盼蓝（trypan blue）染色法是测定细胞活力的最简便的方法。 台盼蓝又称锥蓝，是一种阴离子型染料，它不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色。 细胞存活率(%)＝无色细胞数/细胞总数×100% 注意事项 1.与血液样品接触时应注意安全防护，避免血源性传染病传染。 2.操作应轻柔，细胞悬液应充分混匀，避免损伤细胞活性及细胞丢失。 3.细胞分层液在室温下比重为l.077±0.001g/L；应