东海原甲藻细胞色素b基因实时荧光定量PCR检测.pdfVIP

应 用 生 态 学 报摇 2013年2月摇 第24卷摇 第2期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 ChineseJournal of Applied Ecology,Feb. 2013,24(2):541-548 东海原甲藻细胞色素b基因实时荧光定量 PCR检测体系优化* 1 2 1 2** 3 王曲圆摇 甄摇 毓摇 袁摇 健摇 米铁柱 摇 于志刚 1 2 ( 中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003; 中国海洋大学环境科学与工程学院海洋环境与生态教育部重点实验室, 3 山东青岛266100; 中国海洋大学化学化工学院海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室,山东青岛266100) 摘摇 要摇 为定量检测现场样品中东海原甲藻的细胞色素b(cytochrome b,Cyt b)基因,本研究 设计了该基因的特异性引物,并对现场样品反转录反应体系中加入的模板数量和定量PCR 反应条件进行了优化.结果表明:设计的引物具有较好的特异性,可有效区分不同的藻类;针 对现场样品,在20 滋L 的反转录体系中,适宜加入的RNA模板的量为50 ~200 ng;PCR模板 -1 稀释10倍或向定量PCR反应体系中加入终浓度为0.2 滋g ·滋L 的牛血清蛋白(BSA)均能有 效降低现场样品中抑制物的抑制作用,减小干扰.该方法的建立对从分子水平探讨东海原甲 藻暴发和消亡的内在机制具有重要意义. 关键词摇 东海原甲藻摇 定量PCR摇 细胞色素b基因摇 内参基因 文章编号摇 1001-9332(2013)02-0541-08摇 中图分类号摇 Q178.1,Q7摇 文献标识码摇 A Optimization of real鄄time quantitative fluorescence PCR system in detecting cytochrome b 1 2 1 gene of Prorocentrum donghaiense Lu. WANG Qu鄄yuan ,ZHEN Yu ,YUAN Jian ,MI Tie鄄 2 3 1 zhu , YU Zhi鄄gang ( College of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qingdao 2 266003,Shandong,China; Ministry of EducationKey Laboratory of MarineEnvironment Ecolo鄄 gy, College of Environmental Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 3 266100,Shandong,China; Ministry of Education Key Laboratory of Marine Chemistry Theory Technology,C