原位杂交技术原理及其应用.pptVIP

原位杂交技术 in situ hybridization 核酸分子杂交技术 在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。两条核苷酸单链片段，通过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双链分子 按其作用方式可大致分为两种：固相杂交和液相杂交 液相杂交是指参加反应的两条核酸链都游离在溶液中。液相分子杂交技术包括吸附杂交、发光液相杂交、液相夹心杂交和复性速率液相分子杂交等 固相杂交是将参加反应的一条核酸链固定在固体的支持物上（常用的有硝酸纤维素滤膜，其它如尼龙膜、乳胶颗粒和微孔板等），另一条参加反应的核酸链游离在溶液中。固相杂交包括： 菌落原位杂交（colony in situ hybridization）、 斑点杂交（Dot blot）、 Southern印迹杂交（Southern blot） Northern印迹杂交（Northern blot） 组织原位杂交（Tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交免疫细胞化学技术 原位杂交技术的基本原理 利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。 1.两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子 2.应用带有标记的（有放射性同位素，如3H