灯光照明器具检测实训报告.docxVIP

灯光照明器具检测实训报告 　　实验一细胞培养室无菌环境的建立和实验器具的清洗、包装和灭菌　　一、实验原理　　防止污染是决定细胞培养成功的首要条件。由于体外细胞缺乏抗感染能力，因此无菌技术在细胞培养中显得尤为重要。　　二、实验目的　　1、通过实验，培养良好的卫生观念，确立细胞培养的无菌意识；掌握细胞培养室的消毒及灭菌方法；掌握培养用品的高温消毒方法。通过细胞培养室和主要设备的无菌环境建立，逐步掌握无菌操作概念。　　2、掌握细胞培养室、培养箱和超净台的消毒方法；掌握玻璃器皿、金属器械、橡胶制品的清洗、包装和灭菌方法。　　三、实验材料：　　细胞培养室环境、培养箱、超净台、边台、紫外线灯、70％酒精等等；　　玻璃培养瓶、玻璃滴管、手术器械、圆筒、铝制饭盒等　　电动高压锅、烘干箱、超声洗涤机、酸液及酸缸、纯水仪等　　四、操作方法：　　①、环境消毒　　细胞培养室环境消毒用紫外线灯照射30～60分钟以上才能进入其内工作。培养箱箱体内壁和隔板可用70％酒精擦拭。超净台操作野主要用紫外线消毒。　　②、器械清洗　　1、玻璃器皿的清洗：浸泡?刷洗?浸酸?冲洗　　2、塑料器皿冲洗　　反复利用塑料器皿需经清水浸泡后流水冲洗；流水冲洗?晾干?2％氢氧化钠浸泡过夜?清水冲洗?2～5％盐酸浸泡30min?清水冲洗?蒸馏水漂洗3遍?晾干后包装，以备灭菌。　　3、胶塞等橡胶类用品的处理　　新胶塞：用清水冲洗?2％NaOH煮沸15min?清水冲洗?2～5％盐酸煮沸15min?清水冲洗5次以上?蒸馏水漂洗5遍以上?蒸馏水煮沸10min?倒掉废水，余热烘干胶塞备用；　　旧胶塞：用清水浸泡?2％NaOH煮沸10～20min?清水冲洗?1％盐酸　　煮沸30min?清水和蒸馏水漂洗5遍以上?蒸馏水煮沸10min?倒掉废水，余热烘干胶塞备用。　　4、金属器械的清洗　　新购金属器械：汽油纱布擦去油脂，清水冲洗?酒精棉擦拭，晾干；　　用过的金属器械：清水煮沸消毒?擦拭干净?包装好高压灭菌消毒。　　③、器械包装　　瓶类——硫酸纸+牛皮纸+绳子扎紧　　小器皿、胶塞、刀剪等——饭盒　　吸管、滴管接口部用脱脂棉塞上，装入消毒筒内　　无菌衣、帽、口罩均以牛皮纸或包布包好，绳子扎好　　④、消毒灭菌　　1、干烤——玻璃器皿160～170℃90～120min，或180℃45～60min，金属器械、橡胶制品、塑料制品不能用干烤　　2、高压蒸汽灭菌——培养用液、橡胶制品、塑料器皿——×10min；玻璃器皿、金属器械等可用kPa×15～20min　　3、滤过除菌——不耐热培养液和试剂　　4、紫外线——消毒物品表面　　五、结果分析和讨论：　　思考题：　　1、细胞培养室和超净工作台的消毒要求有哪些？　　培养室和超净工作台的消毒：工作面先用新洁尔灭擦拭一遍后，打开紫外线灯灭菌，用30w紫外线灯管直接照射20—30分钟。然后关闭紫外灯，打开风机。超净工作台要用75％酒精擦拭。培养用液和培养细胞不能放在紫外线下直接照射，在操作时随手携入。　　2、分别叙述玻璃培养瓶、培养液、PBS的消毒灭菌方法。　　玻璃培养瓶用干烤的犯非法杀菌；培养液用高压蒸汽灭菌的方法；PBS的灭菌方法：将PBS倒入溶液瓶内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。注意高压消毒后用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。　　实验二细胞计数及密度换算　　一、目的要求：　　通过L929或HGC-27细胞的细胞计数，掌握准确计数细胞，掌握细胞密度的换算方法。掌握细胞计数板的使用和计数方法；掌握细胞密度换算方法　　二、实验材料：　　L929或HGC-27细胞，血球计数板，倒置显微镜，计数器等。　　三、操作步骤：　　①、准备　　1、样品：取单细胞悬液，稀释到一定比例；　　2、检查记数板：在正式计数前，先用显微镜检查记数板的计数室，看其是否沾有杂质或干枯的菌体。若有污物，则需作以下几步清洗：　　擦洗。用药棉蘸取95%酒精，轻轻擦洗计数板的计数室。　　冲洗。用蒸馏水冲洗计数板，并用毛边纸吸干其上的水分最后用擦镜纸揩干净。　　镜检。镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时，才可用于细胞的计数。　　②、加样：先将盖波片安方在计数室上面，然后摇匀样品取悬液，使它沿着盖玻片和计数板间的缝隙渗入计数室，连续2~3次，直至充满计数室平台为止。　　③、计数：将加好样品的记数板置于显微镜载物台的中央，然后按下列步骤操作：　　找计数室。先在低倍显微镜下寻找计数板上的大方格位置。寻找时显微镜的光圈要适当缩小，使视野偏暗。然后顺着大方格线，移动计数板，使计数室位于视野中间。　　转高倍镜。转至高倍镜后，适当调节光度，使细胞和计数室线条均清晰为止。然后将计数室一角的中格移