目的掌握血清AFP参考区间建立的原理和方法学.PPTVIP

概 述 肿瘤免疫学检验主要涉及肿瘤免疫学诊断和肿瘤患者免疫功能状态的评估。而目前临床上用于肿瘤免疫学诊断项目主要是肿瘤标记物检测，但目前使用肿瘤标记物都是肿瘤非特异性标记物，不仅由肿瘤细胞产生，存在肿瘤患者血液和体液中；也可以正常体细胞产生，健康者血液和体液中也会存在一定量肿瘤标记物，因此，如果将肿瘤标记物作为肿瘤诊断指标时，对临床上使用的肿瘤标记物进行生物参考区间评价和诊断性能评价就显得非常重要，本单元主要以AFP和PSA为例以达到举一反三作用。 实验一 血清AFP参考区间建立实验 实验室应为检验项目提供可靠的参考区间，才能使临床对健康普查者的检验结果作出判断，对病人检验结果有大致的了解，发挥检验报告的作用。因此获得检验项目可靠的参考区间是实验室的重要任务。参考区间的评价一般包括参考区间的建立和参考区间的验证实验。 实验目的 掌握血清AFP参考区间建立实验的原理和方法学，以Modular Analytics E170自动电化学发光免疫分析系统测定AFP参考区间的建立流程为例加以说明。 实验原理 先确定AFP参考区间建立时的纳入人群的标准，选择参考个体，按该项目的检测要求收集标本并在检测系统性能良好的状态下进行AFP浓度的检测，收集检测结果，统计分析，确定化学发光免疫分析系统AFP测定的参考区间。 试剂与器材 选用与检测仪器相配套的试剂、校准品及其他辅助试剂。 按照纳入人群的标准，选择参考人群的新鲜血清标本。 操作步骤 根据文献和实验研究，总结对该项目检测结果产生的生物变异和分析干扰的因素，供选择参考个体时用。 确定参考个体的选择原则（或排除非参考个体的原则），编写与之对应的调查表。 依据调查表和其他有关记录，挑选候选的参考个体。应按照项目在临床使用的要求选择参考个体，在选择参考个体对象时，要兼顾各年龄段，同时应考虑是否有分组的必要（最常见的是分年龄组和性别组）。依据排除原则，剔去不符要求的候选对象。 将采集标本前和采集时对受检查的要求，详细告诉各个受检参考个体，做好准备，要求予以配合。 规范地采集标本，做好分析前的标本预处理。按照相应规程做好标本采集、处理、运送和保存，此外，还应考虑标本采集时的环境条件，标本采集者技术熟练要求和服务态度等。 在良好的控制条件下，用事先指定的分析方法对标本进行检测，获得参考值结果。分析样品的检验方法应有方法学可靠性评价，测定过程有完整质量控制措施 结果计算和分析 绘制分布图，了解数据的分布特性。若数据呈高斯正态分布，或者数据经转换后亦呈高斯分布，可按士1.96S表示95％数据分布范围，或者士2.58S表示99％分布范围等确定参考限和参考区间。 注意事项 为确保参考范围数据的可靠性，建议至少取120个参考值数据，若还需分组统计，则每个分组应有120个数据。 数据中的疑似离群点的判断，建议将疑似离群点和其相邻点的差值D和数据全距R相除，D/R若大于等于1/3考虑为离群点。若有2个或以上疑似离群点，可将最小的疑似离群点作如上处理，若都大于1/3，则所有疑似点都剔去；若都小于1/3，则保留所有数据。若有离群点被剔除后，应即将其他数据补上。 若数据不呈高斯正态分布，则可用非参数法处理。最常见的是以百分位数法确定2.5％和97.5％位数的参考限，以此确定95％参考区间。 方法评价 建立参考区间是实验室开展新的检验项目前必然要进行的一项工作，但由于其需要标本例数多，对人群的纳入标准要求严格；大多实验室参照试剂说明书、教材、或其它权威资料转移为本实验室的参考区间，但需对此类选用的参考区间进行验证评审。 采用简单的方法予以证实，如选取20位健康者，有90%以上的测定结果在参考区间内，即说明实验室选用的参考区间有效。 思考题 请设计建立AFP参考区间的抽样人群的纳入标准？ 实验二 血清PSA诊断前列腺癌的性能评价实验 PSA（前列腺特异性抗原）是一个分子量大约为34 000道尔顿的糖蛋白。在正常的、良性肥大的和恶性变的前列腺组织内以及前列腺液和精液内均可发现PSA。 血清PSA作为前列腺癌诊断指标时，具有较好诊断灵敏度，但存在诊断特异度较低问题，目前，不推荐将PSA检测作为对普通人群或对无症状患者的癌症筛查项目，也不应当作为判断是否存在恶性疾病的一个绝对性依据。 有必要对临床使用的血清PSA诊断前列腺癌的效能进行评价。 实验目的 本实验项目是如何评价定量检测项目对疾病诊断价值。本实验以血清PSA定量测定为例，评价血清PSA对前列腺癌诊断价值。 实验原理 对选择的纳入研究对象的患者采取血液，进行PSA定量检测；对纳入研究对象的患者采取前列腺组织穿刺病理检查，将研究对象分为前列腺癌组和前列腺增生组。 根据PSA定量检测结果制作ROC曲线，根据不同cutoff值，评价其诊断的的