叶绿素的取实验报告.docVIP

植物叶中色素的提取和柱色谱分离实验报告 一．实验目的 1、学习从植物中提取色素的方法。 2、学习柱色谱(层析)的原理及其操作方法。 3、掌握天然药物化学实验报告的一般写法。 二．实验原理 1、绿色植物叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。各种色素能溶解在有机溶剂（无水乙醇等）中形成溶液，使色素从生物组织中脱离出来。 2、柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。吸附剂，常用吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁等。吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越强。溶剂，溶剂分为溶解样品的溶剂和洗脱剂。选择溶剂时还要考虑到被分离物各组分的极性和溶解度。通常是先将要分离的样品溶于非极性溶剂中，从柱顶加入柱中。然后用稍大极性的溶剂使各组分在柱中形成若干谱带。再用极性更大的溶剂洗脱被吸附的物质。为了提高洗脱效果，有时也使用混合溶剂。在本实验中色素成分在不同比例混合洗脱剂的作用下可以分离出来。 三．实验仪器及试剂 仪器：烧杯、量筒、色谱柱、分液漏斗、玻璃棒 、干燥的锥形瓶、滤纸、旋转蒸发仪 、酸式滴定管、布氏漏斗、研钵、胶头滴管、剪刀、天平 试剂：50g新鲜植物叶、中性氧化铝、甲醇 ( 9 5 ％ ，分 析 纯 ) 、乙醇、石油醚 ( 6 0～ 9 0 ％ ) 、丙酮 、无水硫酸钠 、正丁醇 、50g新鲜植物叶、 四．实验内容 1. 绿叶色素的提取 把新鲜绿叶洗净晾干或用滤纸吸干，称取5g绿叶，剪碎后放入研钵，再加入10mL乙醇。研磨后用布氏漏斗抽滤，弃去滤渣。 将滤液放回研钵，每次用10mL 3:2 （体积比）的石油醚 - 甲醇混合液萃取两次，每次需加以研磨并且抽滤。把两次滤液合并，转入分液漏斗中。用5mL水洗涤两次，弃去水-甲醇层, 洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化。石油醚层转入干燥的锥形瓶中用无水硫酸钠干燥。干燥后的液体在旋转蒸发仪上蒸除石油醚至体积约2mL左右。 2.柱色谱分离色素 取一支干净的酸式滴定管，向柱内加入石油醚至柱高约1/2处。再缓慢加入氧化铝，并打开活塞 ，控制流出速度约为2滴/s ，并保持液面不低于固定相。打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝表面溶剂剩下 1－2mm 高时关上活塞。注意，在任何情况下，氧化铝表面不得露出液面。 色素浓溶液用滴管小心加到色谱柱顶部，并要旋转加入。加完后打开下部活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右关闭活塞。旋转加入数滴石油醚，重新打开活塞使液面下降，重复几次使有色物质全部进入柱体内，待色素全部进入柱体后，观察并记录下此时实验的现象。在柱顶小心加洗脱剂—石油醚 - 丙酮溶液 9:1 （体积比）。打开活塞，让洗脱剂逐滴放出，层析即开始进行，用试管收集。当第一个有色成分即将滴出时，取另一试管收集，得橙黄色溶液，它就是胡萝卜素。用石油醚 - 丙酮 7:3 （体积比）作洗脱剂，分出第二个黄色带，它是叶黄素 （1）。再用丁醇 - 乙醇 - 水 3:1:1 （体积比）洗脱叶绿素a（蓝绿色）和叶绿素b（黄绿色）。 五．实验结论与分析 1、本次实验总共重复了三次，第一次采用的是蚕豆叶，提取的色素浓液很少所以色素带分层现象不明显；第二次采用的是野草的嫩叶，提取出来的主要是淡黄色的色素，叶绿素较少；第三次因为时间关系采用了少量的是莴苣叶比较前两次实验，很遗憾实验分层现象还是不明显。通过不同品种的原材料的选取，以及用量的多少对实验很关键，总的来说还是用适当的过量的绿叶较好，可以避免转移过程中的损失，而且绿叶最好是深绿色的肉质植物。 2、研磨时加入适量的乙醇有助于打开植物细胞壁，有利于色素的流出，第一次采用的是甲醇，第二次是石油醚，第三次是乙醇，实验结果从提取的汁液来看第三次的汁液明显是深绿色，第一次是浅绿，第二次是淡黄色。通过查阅文献和实验比较，提取色素过程中，由于抽滤时不好控制，非极性溶剂难免会被抽去，且在几次转移中损失较多，程序繁杂。用浸泡法操作简便易行，损失少，产率高。因甲醇与乙醇的极性相近，乙醇易得，无毒，用95％乙醇通过浸泡的方法提取菠菜色素为此实验的优化条件 。 3、固定相的选择也是一个影响实验结果的关键，此次试验我们组并未将氧化铝和硅胶两种固定相一起作比较，但从别组两种比较的结果来看，通过比较，中性氧化铝虽用量比硅胶稍大，但其装柱 较容易，只要保持比较均匀的速度从 漏斗中加入，且轻轻敲打柱身，柱内气泡就较少，柱子装的也比较实，色带的分离效果比硅胶明显。使用硅胶做固定相时，虽用量